微量离心机如何离心粘稠样本（如组织匀浆）？
一、样本预处理：降低粘度、去除大块杂质
酶消化或化学分解
对于致密组织，可先用胰蛋白酶、胶原酶等酶解，使细胞外基质部分降解，降低整体黏滞性；
也可酌情添加少量去污剂（如0.1% Triton X-100）协助破碎，但须考虑后续实验对去污剂的敏感性。
稀释与缓冲
以合适比例缓冲液（如PBS、Tris-HCl）将匀浆体积稀释2–5倍，既减小剪切阻力，也有助于分散颗粒；
若实验允许，可加入甘油至5–10%，进一步改善流动性并稳定蛋白。
过筛与预离心
通过40–100 μm细胞滤网，将未破碎大组织块或纤维性杂质去除；
预离心（2,000–3,000 ×g，4 °C，5 min），去除大颗粒后，再对上清进行高速离心。
二、离心管与转子选择：兼顾耐压与兼容性
管材和壁厚
管内体积与填充率
样品体积建议控制在管容量的50–80%以内，过满易在离心过程中形成液面波动；
如果样品更粘稠，应适当减小装载量，避免管内压力分布不均。
转子类型
固定角度转子（一般为45°）：有利于颗粒较快沿管壁下沉，沉淀斑呈扇形；
摆动式转子（水平转子）：沉淀集中于管底，方便回收，但平衡要求更高。
三、离心参数设定：结合RCF与时间权衡
相对离心力（RCF）计算
公式：RCF = 1.118 × 10⁻⁵ × r × (RPM)²，其中r为转头半径（cm）
根据颗粒大小、悬浮介质粘度，粘稠样本可适当提高至10,000–15,000 ×g；
转速与循环次数
若单次离心沉淀不完全，可分多次进行，每次设定较短时间（如5 min），中间轻轻吸取上清再继续；
或者先行低速（5,000 ×g，2 min）去除大块杂质，再高速（12,000 ×g，10 min）收集所需成分。
温度控制
为保护蛋白与酶活性，应在4 °C环境下运行；
如果离心机无制冷功能，可在冰上预冷离心管，且连续离心间隔短，保持试剂低温。
四、加速与减速程序：保护沉淀结构
软启动（低加速）
粘稠样品易在快速加速时剧烈振荡，建议选择加速等级2–4（满分5级），减小液体扰动；
软停止（低减速）
避免快速泄能导致沉淀被重新悬浮，减速等级≤3为宜；
如无分级可选，尽量开启“刹车”开关以降低制动强度。
五、平衡操作：确保转子寿命与运行安全
等重量对称放置
粘稠度高的样本质量难以肉眼判断，需在天平上认真配对，每组管差值≤0.01 g；
空管平衡
如样本数量为奇数，可以等量水或缓冲液补足空管，确保对称；
检查卡槽和转子接口
定期清理转子槽内杂物，避免因微小异物造成离心过程中的震动。
六、离心后处理：轻柔回收与二次清洗
弃去上清
使用低粘度吸头或移液枪，沿管壁缓慢移除液体，避免吸入沉淀团；
二次洗涤
若需去除杂质，可在管底加适量洗涤缓冲液（如PBS），轻轻颠倒混匀后再重复一次短时间离心；
沉淀溶解
根据后续实验，加入适量裂解缓冲液缓慢溶散，必要时可在冰浴或超声条件下轻柔处理。
七、常见故障及排除
| 问题现象 | 可能原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| 转子剧烈振动或异响 | 平衡不佳或管中漏液 | 重新精准配重；检查管塞是否紧密；清理残液 |
| 样本分离效率低 | 粘度过高或RCF不足 | 提高稀释倍数；增大RCF或延长离心时间；分步离心 |
| 管壁出现泡沫 | 样本剧烈搅动或缓冲液不兼容 | 选择更柔和的加速/减速程序；更换适合的裂解/洗涤缓冲液 |
| 温度异常升高 | 制冷系统故障或超负荷运行 | 减少单次样本量；清理冷凝器；联系维护人员检查制冷模块 |
八、进阶技巧与应用
结合过滤柱技术
对于核酸或蛋白纯化，可先将匀浆上清通过硅胶柱或磁珠富集，再予以微量离心机快速脱除剩余液体；
多孔板离心
梯度离心
在照片上建立连续蔗糖或聚乙二醇梯度，将样品分层加载，通过高密度介质进一步分离细胞器或大分子复合体。
九、小结
粘稠样本在微量离心机上的成功处理，关键在于预先降低黏度、精确控制离心力与温度、合理设置加减速程序以及严格执行平衡原则。通过分步预离心、梯度分离或结合过滤、磁珠技术，能够进一步提高分离纯度与回收率。掌握上述技巧，可显著提升组织匀浆、粘多糖样本或高蛋白溶液等复杂体系的离心效率，为后续实验提供稳定可靠的样品基础。
