微量离心机的特点

典型微量离心机转速范围可达6,000–15,000 RPM，对应约2,000–20,000×g；一般配备0.2–2 mL 离心管及可更换定角/对称转子，部分型号具有数字化界面和冷冻功能。以 Labnet Mini 为例，其固定转速6,000 RPM（约2,000×g），可快速将微量液滴沉至管底 。

血液样本分离概述

血液样本分离常采用差速离心技术，通过逐步提高离心力来分离出血浆、白白层及红细胞。第一步一般采用低速离心沉降巨型细胞和细胞碎片，继而在更高速度下分离白细胞和血小板，最后获得清亮的血浆或血清液相 。

血浆和血清分离的离心参数

• 血浆分离： 将含抗凝剂的全血样置于室温或4 °C 下，以1,000–2,000×g（约3,000–5,000 RPM，具体值依据转子半径计算）离心10 分钟，可有效去除细胞成分，获得上清血浆 。

• 血清制备： 收集未添加抗凝剂的全血，室温静置15–30 分钟促凝后，以1,000–2,000×g（同上）离心10 分钟，去除血块并获得血清 。

Buffy Coat（白白层）分离参数

为了富集白细胞和血小板，可在室温下将全血与等体积缓冲液轻柔混匀后，以800×g（约2,500 RPM）离心10 分钟，制备出的灰白色薄层即为白白层，含白细胞和血小板，适合下游细胞分选或DNA提取 。

红细胞沉淀与血细胞分级

若研究需分离红细胞或更粗细胞团，可采用更高转速。如在4 °C 下以3,500 RPM（约1,000–1,200×g）离心10 分钟，可得到清晰的红细胞沉淀层，血浆或血清被挤压至上清 。

血浆进一步纯化与去除血小板

若需获得血小板贫乏血浆（Platelet-Poor Plasma，PPP），可在前述血浆分离后再以2,000×g（约5,000–6,000 RPM）离心15 分钟，去除残余血小板，获得适用于凝血学测定或蛋白组学分析的超清血浆 。

温度控制与制动模式

离心温度对实验稳定性影响显著。血液样本建议在4 °C 下离心，以减少蛋白降解和细胞代谢；同时在制备细胞分层（如白白层）时应关闭制动（brake off），以避免层间混合和气溶胶形成 。

操作注意事项

• 样品装载时务必平衡对称，避免不平衡报警和转子损坏。

• 选择与样品体积匹配的转子和离心管，管壁应干净且无裂痕 。

• 离心结束后应立即取出分层液，以防再分散。

动力学与影响因素

离心分离效果受速度、时间、温度及离心半径共同影响。原理上，转速每翻倍，RCF 增加四倍；延长离心时间有助于更完全分层，但过长可导致样品加热与蛋白降解，应综合平衡 。

参数选择建议与常见应用

• 临检生化检测： 血清/血浆，1,500×g 10 分钟；

• 细胞组分富集： 白白层，800×g 10 分钟；

• 血小板相关： 先1,000×g 10 分钟分离血浆，再2,000×g 15 分钟除板；

• 分子下游： 可根据核酸/蛋白需求适当降低温度或延长时间。

小结

通过合理选择微量离心机的转速、离心力和离心时间，结合温度控制与制动模式，能够高效、可重复地分离血液中各类组分，为后续分子生物学和临床检验提供可靠样品。各实验室应根据自身转子类型与样品量，参照上述参数并适当优化。