台式离心机离心后样品处理：上清转移、沉淀重悬要点及防止二次污染？
一、引言
台式离心机广泛用于分离和浓缩生物学、化学及环境样品。离心完成后，实验人员需对上清液和沉淀分别进行转移和重悬操作，直接影响实验结果的准确性及后续步骤的成功率。同时，不当的操作易引入外源污染，导致交叉污染或样品降解。本文从操作规范、关键要点及防止二次污染的角度出发，系统阐述离心后上清转移、沉淀重悬的流程与技术要点，并针对常见风险提供完善的防控措施。
二、上清液转移：前期准备
工具与环境要求
使用经过高温、高压或化学消毒的移液器、枪头和容器；如果为一次性塑料耗材，选择经γ辐照灭菌或预灭菌包装产品。
操作区域建议为生物安全柜或洁净台，配备无纺布垫或可更换的消毒纸巾，并保证气流稳定。
实验人员需配戴一次性手套、实验服和口罩，避免人体微生物或化学污染。
上清液收集容器准备
根据上清液体积选择合适容量的离心管或离心瓶；大体积样品可使用多通道分装器或带刻度干净烧杯。
容器标识清晰，注明样品编号、批次号及操作日期，预写标签并贴于容器侧面，防止倒置时标签脱落。
离心机停止与舱门打开
确认离心机完全停止旋转后再开盖，避免残余转动导致样品甩出。
打开舱盖前，用仪器自带指示灯或噪音确认状态，如异常震动或声音应再次确认设备停止。
三、上清液吸取与转移要点
吸头及移液器校准
使用前对移液器准确度和精密度进行校验，确保±1%以内；定期校准并记录。
高精度操作建议使用气体隔膜式或电子移液器，减少误差。
采用斜角吸头技术
将吸头端部轻触液面附近，倾斜约45°，沿管壁缓慢吸取，避免产生气泡或扰动沉淀。
吸取速度均匀，吸头不要触碰管底或转子槽，以免再次扰动沉淀或刮伤管壁。
分段吸取与观察
对大体积上清，可分三次以上吸取，每次剩余约50–100 μL，以保证沉淀完整。
吸取过程中注意观测沉淀边缘，如有白色或透明混浊漂浮物出现，立即停止，排除悬浮物后继续操作。
转移注意事项
将上清轻缓释放至目标容器，避免液流冲击容器底壁；可沿管壁慢慢沿着壁面导液。
每次转移后更换干净吸头，防止交叉污染。若样品具有细胞或蛋白成分，单道移液器更换吸头间隔应短，建议每0.5 mL更换一次。
四、沉淀重悬：策略与技巧
选择合适的重悬液
根据实验要求，选用生理盐水、PBS缓冲、细胞培养基或特定裂解缓冲液；需提前滤过或灭菌。
对敏感细胞或蛋白，应在重悬液中添加适量的蛋白酶抑制剂或稳定剂（如BSA、甘油等）。
温度及试剂预热/降温
对温度敏感样品（细胞、酶），将重悬液预热至4 ℃（或37 ℃）并在低温离心桶中进行重悬，以减少温度冲击。
若沉淀在冰浴环境中，应使用预冷移液器和冷却离心管，以保持样品稳定性。
重悬动作要点
缓慢加入重悬液至管壁，沿着壁面下滴，避免直接冲击沉淀；每次加液不超过原体积的20%。
间断性轻震离心管：手指轻敲或颠倒摇动数次，直至可见沉淀松动。
反复上下缓慢吹打：使用与体积匹配的移液器吸头，贴管壁缓慢吹打吸放5–10次，直至沉淀粒子分散均匀，无肉眼可见团块。
增效技巧
超声辅助：对于难以溶散的微粒，可短时（2–3秒）低功率超声处理，但需观察状态，避免过度破碎。
磁力搅拌：对于磁性颗粒，建议使用小型磁力搅拌器轻速搅拌1–2分钟，均匀分散。
五、防止二次污染措施
操作环境管理
定期对操作台面和生物安全柜进行擦拭消毒，使用75%乙醇或1%次氯酸钠，确保空气层洁净。
定期更换生物安全柜内过滤棉和HEPA过滤器，减少空气颗粒物。
一次性耗材与专用工具
采用一次性吸头、离心管和手套；对于重复使用的玻璃或不锈钢器具，须高压灭菌或化学消毒。
为不同样品类别（DNA、RNA、蛋白质、微生物）专门配备工具并标识，避免混用。
手套与防护服更换规则
每次进入操作区前更换手套，操作中如触碰外部物品（门把手、手机）须立即更换。
长时间操作（>30分钟）或从高污染样本区转移到低污染区时，须更换外层实验服和手套。
样品隔离与标识
严格执行单一样品批次操作，不同批次或不同项目样品不得同时操作。
对易污染或有活性污染源（细菌、病毒）样品，须在独立柜内进行操作，并用封闭容器保存。
废弃物处理
使用专用二级生物危害袋或有害废物箱存放废吸头、废液，密封后高压灭菌或委托专门机构处理。
多次使用的器皿洗涤后立即进行高温高压灭菌，并干燥后置于洁净区域。
六、质量控制与记录
操作记录表
记录离心参数、上清转移体积、重悬试剂、操作人员和操作时间。
对每一步骤的观察（如沉淀松散程度、上清清澈度）进行备注。
交叉污染监测
定期取空白对照（无样品）进行离心及转移操作，检测PCR或微生物培养以评估污染程度。
对疑似污染事件进行追溯，并开展根因分析。
培训与考核
对新员工和交叉培训人员进行离心后样品处理操作培训，并进行实际演练考试。
定期组织操作审核，发现偏差及时整改并更新SOP。
七、SOP流程示例
离心结束→确认停止→打开舱门
上清转移前：工具准备、环境消毒、容器标识
上清转移：45°倾角吸取、分段转移、更换吸头
沉淀重悬：预冷/预热重悬液、沿壁加入、轻震→吹打→观察
终检：检查重悬均匀度、记录操作细节
废弃物高压灭菌→台面及耗材消毒→更换手套
八、结论
规范的离心后样品处理流程是确保实验重现性与数据可靠性的基础。通过严谨的操作规范、科学的技术要点以及严格的防污染措施，可最大程度地减少二次污染和样品损失，为后续分析、检测及生产应用提供坚实保障。
