一、引言 高脂质或高油脂含量样品（如血清、乳制品、纳米脂质体载药体系等）在离心分离过程中常表现出显著的相分层特性，且对温度、转速及离心介质敏感。本指南聚焦台式离心机操作，结合样品物理化学性质，深入解析分层机理、工艺参数优化及运行注意事项，以提升分离效率与样品回收率。

二、样品性质与分层机理

1. 样品粘度与密度：高脂样品粘度大，密度低于水相，易在上清形成乳状脂肪球层。

2. 相界面张力：脂质相与水相之间界面能较高，分层时需要足够RCF克服界面张力形成清晰分层。

3. 乳化稳定性：天然乳状体系中脂滴往往包裹表面活性蛋白，需优化离心条件促进脱稳聚集。

三、离心介质与缓冲体系选择

1. 缓冲离心：选用pH与离心机兼容的生理缓冲液（PBS、HEPES），保持体系稳定；

2. 密度梯度：对低密度脂滴，可在样品下层叠加密度梯度介质（蔗糖、Percoll、OptiPrep）构建梯度，提高分层分辨率；

3. 表面活性剂：针对纳米油滴可添加极低浓度表面活性剂（Tween 20、Pluronic F68），防止管壁吸附。

四、转子与离心管选择

1. 转子类型：推荐使用固定角度转子（25°–45°）以缩短沉降距离；对于易漂浮的脂滴，可选水平转子（摇臂转子）获得更平整的相界面。

2. 离心管材质：PP或PC材质管壁疏水性低，减少样品吸附；管底圆弧设计利于相界面观察。

3. 容量匹配：微量管（0.5–2 mL）适合少量高浓脂样品；15 mL或50 mL管更适合大量体系，确保样品体积不超过管容量的70%。

五、转速与相对离心力（RCF）优化

1. 起始RCF：建议从1000×g起步，观察初步分层，然后逐级增加至3000–5000×g；

2. 最大RCF：避免超过8000×g，以免高剪切破坏脂滴结构或产生热效应；

3. 转速步进：可采用分段离心（如1000×g×5 min → 3000×g×10 min）促进分层分级回收。

六、温度控制与热效应管理

1. 冷却设置：将设定温度控制在4℃–10℃，避免高温引发脂滴聚集或蛋白变性；

2. 预冷转子/管：可将转子和离心管预先置于冰箱或预冷舱中5–10分钟，减少温度波动；

3. 运行中监测：开启制冷模式并记录温度日志，确保离心过程温度波动不超过±2℃。

七、装载与平衡方法

1. 对称装载：确保同质样品或等重平衡管对称放置，避免不平衡造成离心机报警或损坏；

2. 预平衡：样品与平衡管体积和质量误差控制在±0.01 g以内；如存在气泡应轻轻敲击排除；

3. 紧固盖栓：检查离心管盖与转子锁紧件的密合度，防止泄漏或振动失衡。

八、分层观察与样品回收

1. 取层顺序：通常先取上层脂滴相，再取中间水相，上清与沉淀需分两步缓慢抽取；

2. 微量操作：使用窄头移液器或微量注射器，轻柔贴壁抽取，避免扰动界面；

3. 二次离心：如分层不清晰，可对回收上清或底相进行短时（2000×g×3 min）二次离心。

九、典型问题与解决方案

1. 分层不清晰：检查RCF是否足够、相梯度介质浓度是否合适；

2. 脂滴再分散：因高速或热效应造成脂滴破碎，需降低转速并加强温控；

3. 管壁吸附：管壁驻留样品量大，可更换表面疏水材质管或加入载体蛋白（BSA）阻滞；

4. 泄漏污染：检查离心管密封圈完好性及安装姿态，必要时更换老化件。

十、清洁与消毒注意事项

1. 样品残留清洗：先用中性清洁剂浸泡10–15 min，再用去离子水冲洗3次；

2. 有机残留去除：对油脂类污染，可使用轻度有机溶剂（70%乙醇、水/异丙醇1:1）擦拭；

3. 高压灭菌：可对耐温离心管和转子进行121℃×20 min灭菌；不耐高温件需化学消毒。

十一、实验室安全与废弃物处置

1. 溢出与泄漏：操作区应铺设吸油垫，做好即时吸收与清理，并用消毒液擦拭；

2. 废液回收：高脂废液需先分层，取下水相后再进行溶剂萃取或中和处理；

3. 固体废弃：一次性离心管、湿润纸巾等按化学或生物废弃物分类收集并委托专业机构处理。

十二、总结与建议 高脂或高油脂样品的离心分层依赖于RCF、温控和介质选型的综合优化。通过合理的梯度设计、转子选择及温度管理，可实现分层高效、回收率高且重复性好的分离效果。结合规范的操作流程与问题排查方案，能够显著提升实验室对复杂体系的处理能力。