第一章 目的

1. 规范微孔板振荡器实验操作流程，保证实验内容系统、可重复、可追溯。

2. 提高实验数据准确性和可靠性。

3. 降低因操作不当导致的设备损坏和试剂浪费。

4. 确保实验人员安全，落实实验室管理要求。

第二章 适用范围

本SOP适用于本实验室所有使用微孔板振荡器（包括但不限于96孔、384孔、1536孔板）的生化反应、酶活性检测、高通量筛选、细胞培养等相关实验。实验人员须严格遵守本规范进行操作。

第三章 职责分工

1. 实验室负责人

• 负责本SOP的制定、审核、签字及定期评审；

• 监督实验室整体运行及安全管理。

2. 仪器管理员

• 定期校准、保养振荡器，维护设备性能；

• 负责设备故障排查和报修记录；

• 保管振荡器操作手册及维护日志。

3. 实验操作员

• 严格按照本SOP执行振荡实验；

• 做好实验前准备及实验后清理；

• 详细记录实验过程及结果；

• 对实验中发现的问题及时向仪器管理员或负责人报告。

4. 质量管理员

• 定期检查实验记录和设备维护记录；

• 对偏差或不符合情况提出纠正与预防措施；

• 协助组织SOP培训和新员工上岗评估。

第四章 仪器设备和试剂

4.1 仪器设备

• 微孔板振荡器（型号、序列号、最后校准日期）

• 移液器（P10、P200、P1000各1支）及相应吸头

• 离心机、恒温水浴锅（如实验需求）

• 电子天平（精度0.1 mg）

• 试管架、离心管、刻度吸管等常用耗材

4.2 试剂与耗材

• 实验所需缓冲液（如PBS、Tris-HCl缓冲液等）

• 酶或底物溶液（注明生产批号及有效期）

• 微孔板（96孔平底/圆底/非吸附板，根据实验设计选择）

• 细胞培养试剂（如培养基、血清、抗生素等）

• 无菌水、无菌离心管及无菌笔、无菌过滤器

第五章 实验前准备

1. 实验方案确认

• 确认实验设计、振荡参数（频率、幅度、时间）及温度要求；

• 准备实验记录表格，打印“微孔板振荡实验记录单”。

2. 设备检查

• 检查振荡器外观，确认无松动或异常声响；

• 开机预热（如带温控功能）至设定温度，运行自检程序；

• 查看面板按键与显示屏是否正常。

3. 耗材及试剂准备

• 按实验计划配制所有缓冲液并进行pH校正、过滤灭菌；

• 标记并分装酶/底物溶液，置于冰箱4℃或-20℃保存；

• 准备好对应孔板，确认孔板编号及排布示意图。

4. 环境与安全

• 实验台面清洁干净，无多余杂物；

• 按照实验室规定佩戴实验服、一次性手套及护目镜；

• 整理好废弃物收集容器，并准备好消毒液。

第六章 操作流程

6.1 样品加载

1. 按照孔板示意图，将反应体系（缓冲液、底物、酶或细胞悬液）移液至对应孔中，孔体积和排列顺序需在记录单中详细标注；

2. 加液后轻轻敲击孔板底部数次，使气泡逸出并保证液面平整；

3. 用抗污染封板膜或透气膜封贴保温，如有蒸发风险，确认膜贴牢固。

6.2 参数设置

1. 在振荡器面板选择“振荡模式”，设定振荡方式为水平振荡、摇摆振荡或轨迹振荡；

2. 输入振荡频率（单位：rpm或Hz）及振幅（单位：mm或°），并确认仪器支持该范围；

3. 设置振荡时间及定时周期（连续或间歇模式）；

4. 如有温控功能，设定目标温度并启动恒温程序；

5. 检查所有参数后，按“启动”键，使振荡器进入预运行状态。

6.3 实验监控

1. 振荡开始后，确认振荡器工作平稳、无过度振动或异响；

2. 如实验时间较长，需在中点或关键时间点观察孔板变化，及时拍照或记录；

3. 若出现泡沫或液面不稳，立即停止并调节参数，或更换封板膜。

6.4 实验结束

1. 振荡程序结束后，按“停止”键，待停止确认后再打开振荡器盖；

2. 取出孔板，放置于台面静置1–2分钟，待缓冲液平稳后再进行下游检测；

3. 根据实验要求，将孔板置于酶标仪、荧光读板机或细胞培养箱内继续后续操作；

4. 将剩余试剂收回冷藏，废液倒入废液桶并消毒处理。

第七章 数据记录与处理

1. 记录完整性

• 按“微孔板振荡实验记录单”逐项填写样品编号、试剂批号、振荡参数及开始／结束时间；

• 对于异常情况，如温度偏差、设备报警，应备注说明并签名。

2. 数据导出与分析

• 如振荡器具备曲线记录功能，将振幅、频率、温度等原始曲线导出为CSV或Excel文件；

• 结合实验结果，将温度与振荡参数曲线绘图，并与对照组或历史数据对比分析；

• 所有原始数据与分析结果需存档并上传至LIMS系统（如适用）。

3. 结果复核

• 由同实验组另一人复核记录单与原始数据，确保无遗漏、无误填写；

• 审核后记录单上加盖“复核”章并签字。

第八章 故障排查与日常维护

1. 故障排查

• 如果振荡器无法启动，先排查电源与保险丝，确认电源正常；

• 按键失效时，参考“按键失效排查SOP”中的步骤；

• 如振荡幅度或频率异常，检查设置参数是否超出设备规格，并查看机械连接是否松动。

2. 日常维护

• 每周用无水酒精擦拭设备外壳和面板；

• 每月清理振荡托盘及底座，确保无沉积物；

• 每季度润滑机械运动部件，并检查皮带或滑轨磨损情况；

• 每年至少一次由仪器管理员进行校准并记录校准报告。

第九章 实验室安全与废物处理

1. 安全规范

• 全程佩戴实验服、手套、护目镜，避免试剂或溶液飞溅；

• 振荡器在高转速或高温模式下运行时，不得打开机盖；

• 如遇异常噪音或异味，立即停止设备并联系仪器管理员。

2. 废物分类与处置

• 含生物样品或细胞的废液加入适量灭活剂（如次氯酸钠）预处理后再倾倒；

• 源自化学试剂的废液需按照化学品安全技术说明书（MSDS）分类收集；

• 使用一次性耗材（吸头、离心管等）进入可焚烧垃圾；

• 清洁棉签、滤纸等含有少量试剂的废弃物应浸泡消毒后再处理。

第十章 附录

1. 术语和缩写

• RPM：每分钟转数（revolutions per minute）

• PBS：磷酸盐缓冲液（phosphate-buffered saline）

• LIMS：实验室信息管理系统（laboratory information management system）

2. 记录表格样式

• 微孔板振荡实验记录单模板（见附件A）

• 振荡参数导出与曲线分析报告模板（见附件B）

3. 参考文献

• 《现代实验室仪器管理与维护》

• 《微孔板技术在生命科学中的应用》