一、质量管理体系要求

1. 合规标准与法规依据

• 明确符合的GMP法规条款（如《药品生产质量管理规范》附录、欧盟GMP Annex 1、PIC/S指南等）。

• 记录遵循的行业标准与检测标准编号，如 ISO 13485、ISO 14644-1、ISO 14644-7、ISO 9001 等。

2. SOP与工作指导书

• 所有关联操作必须编写并生效的操作规程（SOP），包括开关机、加样取样、紧急停机、清洁消毒、校准维护等。

• SOP版本控制严格管理，变更审批流程清晰、签字完整，确保审计时可以追溯每一次变更。

3. 变更控制管理

• 对硬件、软件、流程、参数等任何变更均需进行风险评估、变更申请、审批、实施、验证和评估。

• 变更记录需包括变更原因、实施方案、相关SOP修订、培训记录以及变更后效果验证报告。

4. 文件与记录管理

• IQ/OQ/PQ报告、校准证书、维护保养记录、故障记录、偏差报告、质量事件报告等应归档并有完整目录。

• 文件存储方式应符合纸本与电子双重备份，访问权限分级，防止篡改和丢失。

二、设备资格确认（Qualification）

1. 安装确认（IQ：Installation Qualification）

• 验证设备型号与配置
  核对采购清单、出厂合格证与现场实际型号、配件（架板、湿盘、过滤器、门封条等）是否一致。

• 环境与基础设施
  确认培养箱放置地点平整、承重符合要求，电源、电气接地、气源接口、排水及排气符合设备说明书要求。

• 管线与连接检查
  检查CO₂气体管路是否旋紧、气瓶压力是否正常、进气过滤器和排气过滤器安装是否到位、排水管畅通。

• 安全互锁与报警装置
  验证门锁、急停按钮、过温、断电、气体泄漏报警等安全功能是否完好、灵敏。

2. 运行确认（OQ：Operational Qualification）

• 参数设定与功能测试
  按说明书对温度、CO₂浓度、湿度、换气比、门加热功能、风扇运转、报警阈值、程序运行等功能进行验证。

• 自检与报警验证
  人为触发超温、断电、气体中断、门未关好等异常，确认设备能及时发出声光报警并记录日志。

• 均一性与波动度测试
  使用多点温度校准仪或数据记录仪，在箱体上、中、下、前、后各点测量温度、CO₂浓度，验证均一性和保持稳定时间是否满足规范要求。

3. 性能确认（PQ：Performance Qualification）

• 模拟实际负载测试
  在满载或典型载荷（如 10 个 75 cm² 培养瓶）情况下，连续运行72小时或更长时间，监控温度、CO₂、湿度波动。

• 生物学验证
  通过培养模型菌株或对照细胞系，验证在设定条件下的增殖率、活细胞比例等指标是否符合预期。

• 再确认与定期验证
  PQ 一次通过后，需按年度或更频繁周期执行再验证，确保长期稳定性。

三、清洁与消毒管理

1. 清洁消毒方案

• 清洁频率与方法：日常清洁、周度深度清洁、月度灭菌。使用经验证的清洁剂（如70%乙醇、过氧化氢喷雾或其他经验证不损伤内胆涂层的消毒剂）。

• 消毒流程：先清洁可拆卸部件（架板、湿盘）并在合格区域消毒；对箱腔表面、门内侧和密封圈逐一擦拭；末尾进行干燥或通风。

2. 消毒效果验证

• 生物指示剂检测：定期放置芽孢杆菌生物指示剂（BI）验证清洁消毒效果，养殖后确保无菌落生长。

• 环境微生物监测：使用沉降法或空气采样法，监测箱内空气与表面微生物负荷。

3. 防交叉污染措施

• 分区摆放与标识：不同实验或不同生物安全级别的样品分区摆放，使用颜色标识或标签。

• 一次性耗材与专用工具：对高风险微生物使用一次性耗材或专用清洁工具，避免交叉。

4. 清洁记录与审核

• 清洁表格：记录日期、操作人员、使用清洁剂及浓度、清洁部位、验证结果和签字。

• 定期审核：质量管理部门定期审查清洁记录，确保完整、准确、及时。

四、校准与维护保养

1. 校准管理

• 传感器校准：温度传感器、CO₂传感器、湿度传感器需由资质校准机构按SOP周期校准，校准报告和证书归档，证书有效期内方可使用。

• 校准点位：至少在内部中心点和四角（上下、前后）进行多点校准，验证均一性。

• 校准工具与器具：使用国家或行业溯源的标准器具，如干块校准槽、标准气瓶等，并定期校核这些器具。

2. 维护保养计划

• 周度：清洁风机叶轮、滤网；检查湿盘和架板；检查门缝加热电缆。

• 月度：清洁箱体内壁和外表；更换湿盘水；检查接地电阻；测试报警装置。

• 季度：检查电气元件、继电器和触点；检查风机电机润滑状况；更换HEPA滤网（若配备）。

• 年度：全面拆卸清洗、检查加热管和隔热层完整性、检查制冷系统、校准和PQ复测。

• 日常检查：每日检查电源线、CO₂气源管路、湿盘水位、门封完整性、排水管畅通、报警灯/蜂鸣器正常。

• 周期保养：

3. 维护记录

• 维护人员需填写维护日志，记录维护内容、发现问题、采取措施、使用备件、后续验证结果及签字。

• 保持电子和纸质双重记录，方便审核和追溯。

五、运行控制与记录管理

1. 运行日志

• 自动或手动记录起停时间、设定参数、实际记录（温度、CO₂、湿度）以及报警事件和处理情况。

• 运行日志应保存至少1年或符合内部规定，日志文件名应包含日期与设备编号。

2. 参数变更审批

• 任何对温度设定、CO₂浓度设定、报警阈值、换气频率等关键参数的修改，必须填写变更申请单，经QA与技术主管审批后才能实施。

• 所有变更均需记录在运行日志中，包括修改人、修改时间、修改原因及效果验证。

3. 程序管理

• 阶梯式或多段培养程序需按SOP编制程序文件并版本管理。

• 定期（如半年）审核程序库，清理废弃或不再使用的程序，确保程序可追溯且适用。

4. 报警与偏差处理

• 制定偏差处理流程，对每次报警事件进行记录、分析、整改，提交偏差报告并归档。

• 对频繁报警或超限事件进行根本原因分析（RCA），并制定预防纠正措施（CAPA），在下一次审核中评估实施效果。

六、环境与样品管理

1. 实验室环境监控

• 实验室空气洁净度（如ISO 7级）、温湿度、气流速度等条件需定期检测并记录。

• 培养箱放置区域应无剧烈振动、无直射光照和无强风口，以避免环境干扰。

2. 样品放置与标识

• 每次实验要明确样品批号、日期、操作者信息，并张贴在培养皿或培养瓶上。

• 使用批次可追溯编号，记录样品取放时间与位置，防止样品错放或混淆。

3. 样品取样和加样操作

• 建立取样/加样SOP，规定“快开快关”原则、无菌手套更换、消毒步骤。

• 在SOP中注明取样口或内门的使用方法，确保取样过程不污染内腔环境。

4. 废弃物与泄漏应急

• 样品废液、残渣和消毒液的处置要符合生物安全与实验室危险废物管理条例。

• 漏液或意外泄漏时，立即按照应急预案执行，包括隔离污染区、喷洒消毒剂、记录事件并上报。

七、风险与偏差控制

1. 风险评估

• 针对温度失控、CO₂浓度偏差、细胞污染、断电事故等高风险场景，开展FMEA（失效模式及影响分析），制定风险等级及相应控制措施。

• 定期（如年度）重新评估风险矩阵，并根据新发现或行业经验更新控制计划。

2. 偏差管理

• 对所有超限事件、偏差事件均需填写偏差单，明确事件描述、影响范围、根本原因、纠正和预防措施。

• 偏差调查结果需经QA审核，报告中应包含时间、地点、人物、设备编号、关联样品及改进计划。

3. CAPA（纠正预防措施）

• 对重点偏差事件制定CAPA计划，分配责任人、实施时间及验证指标。

• 定期跟踪CAPA实施进度，验证措施的有效性，并将评估结果记录归档。

八、培训与人员管理

1. 操作人员培训

• 新人员上岗前必须完成“150i培养箱操作与GMP要求”培训，考核通过后方可签字操作。

• 培训内容包括设备原理、SOP要点、偏差处理流程、安全与紧急操作。

2. 维护人员资质

• 维护工程师需具备电气与气路维护资质，参加厂商或内部专项培训，并持证上岗。

• 维护工程师需接受GMP基础与偏差管理培训，熟悉QA审核要点。

3. 定期技能考核

• 每年至少一次理论考试与实操演练，考核内容涵盖清洁消毒、校准操作、偏差处理、紧急停机与恢复。

• 考核合格后方能继续独立操作，考核记录与资格证书归档并定期复审。

九、供应商与备件管理

1. 供应商评估与审核

• 对赛默飞世尔及第三方备件供应商进行资质审核，包括质量体系认证、生产能力、服务响应速度、历史表现。

• 关键备件（传感器、滤网、门封条、加热管等）需有合格证、出厂检验报告和批号追溯。

2. 备件库存管理

• 建立最小库存量与采购周期，确保常用易损件及时供应，避免因停机等待备件影响生产。

• 库存备件需定期盘点，品类、数量、批次及有效期都要在系统中清晰记录。

3. 备件更换与验证

• 更换备件后需进行现场功能测试或OQ确认，确保更换件性能满足要求。

• 更换记录要完整，包括更换日期、人员、备件编号及验证结果。

十、数据完整性与审计追踪

1. 数据采集与存储

• 运行参数应由系统自动采集并以不可更改格式存储（如只读数据库或WORM存储设备）。

• 手工记录的日志本或表格需要加签、盖章并及时电子化归档。

2. 访问控制与审计日志

• 系统权限分级管理，所有操作都需登录账户并记录时间、IP、操作类型。

• 审计日志对关键操作（如参数修改、程序删除、数据导出）要有专门的审计条目，并且不可删除或修改。

3. 备份与恢复策略

• 数据库和日志文件需每日自动备份并保留至少三个月；关键文档和校准证书需定期同步至异地备份。

• 定期演练恢复流程，确保在数据丢失或系统故障后能够快速恢复。

4. 电子签名与纸本签名

• 关键审批和验证环节（IQ/OQ/PQ报告签署、偏差报告签字、培训考核签名）需同时保留电子签名与纸本签名，以满足不同审核需求。

• 电子签名系统需符合合规标准（如21 CFR Part 11），具备签名时间戳、签名者身份验证和签名审计功能。