一、导言
低速离心机因其温和的分离力和多功能性，广泛应用于生物样品、血液标本、细胞悬液和环境检测等领域。但不同样品在成分、密度、黏度、温度敏感性等方面差异巨大，若采用统一操作流程，常产生分离不彻底、细胞损伤、沉淀吸附或交叉污染等问题。因此，制订因样品类型而异的操作规程，不仅可提高分离效率，还能最大程度保护样品完整性与实验可重复性。

二、离心原理与关键参数
低速离心机通过转子高速旋转在离心力场中，利用样品中各组分密度差异实现分离。关键参数包括：

1. 相对离心力（RCF）：RCF=1.118×10⁻⁵×r(mm)×(rpm)²，可根据管底至转轴距离（r）与速度（rpm）换算。

2. 转速（rpm）与时间：直接影响沉降效果，速度越高、时间越长，颗粒下沉越彻底，反之易残留。

3. 温度控制：对于热敏性或酶活性样品（如RNA、蛋白），需设定4 ℃或更低温度；普通血液或微生物离心可常温。

4. 加速/减速程序：缓冲加速和缓慢制动可减少样品扰动，避免重悬浮或裂管。

三、样品特性对流程的制约
不同材料分离时，需综合评估：

• 密度范围：血清（1.03 g/cm³）、细胞（1.07 g/cm³）、细菌（1.1 g/cm³）等差异。

• 黏度级别：高黏度样品（如血浆、凝固蛋白）需延长离心时间或降低转速，避免管壁滞留。

• 温度敏感性：RNA提取前冷离心可防止RNase活性；组织匀浆后低温离心减少蛋白降解。

• 管壁吸附：蛋白和病毒颗粒易附着在塑料管内壁，须选用低吸附材质离心管或预涂缓冲液。

四、参数选择与转子类型

1. 固定角转子：适合快速分离、沉降层薄，但对于多成分梯度分离不如摆动转子均一；

2. 摆动转子：可获得平整沉淀面，便于液体吸取与分层，是血清、细胞悬液分离首选；

3. 管材与容量：5 mL离心管常配5000 rpm／5 min；15 mL管常配3000 rpm／10 min；50 mL锥形管可在2000 rpm／15 min下分离大体积悬液。

五、常见样品类型及操作要点

1. 全血与血浆／血清

• 血液静置后缓慢加速至1500 rpm，离心10 min；取上清为血浆（含抗凝剂）或血清（自然凝固后）并迅速分离。

• 若需分层更多，400×g／15 min可沉淀血小板。

2. 动物／植物细胞悬液

• 贴壁细胞传代时，300×g／5 min足以回收多数细胞，过高速度易损伤细胞膜。

• 植物细胞因细胞壁加固，可选500×g／7 min。

3. 尿液与体液

• 800 rpm／5 min可沉淀大部分细胞成分，若需微粒或晶体，可增至1500 rpm／10 min。

4. 微生物（细菌／酵母）

• 3000 rpm／5 min可回收大肠杆菌，若为高密度菌株或大体积（≥50 mL），可调整至5000 rpm／10 min。

5. 核酸／蛋白提取前样品

• 4 ℃、10000 × g／10 min，用于去除细胞碎片。若实验室只有低速离心机，可反复3000 rpm／10 min离心2~3次。

6. 组织匀浆上清

• 初步组织碎片沉淀：1000 rpm／5 min；再转低温高速收集细胞器，若低速离心机最大8000 rpm，可进行10000×g以下转速。

六、冷却与温控模式
对酶学、RNA研究及蛋白组学样品，应启用4 ℃模式，并预先制冷10 min；若离心时间超过30 min，可间断开盖检查并快速关闭，以免温度漂移。对于非敏感样品，室温运转可节省预冷时间。

七、平衡与安全

1. 等重量配对：所有管子须对称放置并严格等重量，否则易产生强烈振动损坏转子轴承。

2. 检查裂纹与腐蚀：定期用肥皂水检测转子表面，若发现气泡渗出或腐蚀应立即报废。

3. 加速/制动设置：处理脆弱沉淀物时采用缓冲加速（ACCEL 3）与缓慢制动（DECEL 1），减少样品扰动。

4. 防护措施：戴手套、护目镜，确保离心机摆放水平、盖锁紧后再启动。

八、制定差异化SOP的建议

1. 分类管理：建立样品类别清单（如血液、细胞、核酸），为每类指定推荐转速、时间、温度与加减速曲线。

2. 验证与记录：首次执行时对照参数监测分离效率（如上清清澈度、沉淀量），并记录批次差异；定期复评并更新标准。

3. 培训与考核：对实验室人员进行操作流程培训，并通过考核确保规范执行。

4. 质量控制：加入对照管（含已知粒径标准或预先配比的悬液）进行并行离心，以便判定设备与方法稳定性。

5. 偏差处理：当结果异常（如沉淀量过少、样品破碎），应首先检查是否漏配对平衡管、转子兼容性或温控失效。

九、后期维护与升级
低速离心机长期运行后转子易磨损，建议每季度进行专业维护，清洁轴承并更换O形圈；若频繁分离高黏度或含腐蚀性化学品样品，应选用涂层转子并适时更换，以保证性能与安全。

十、结语
综上所述，针对不同实验需求，应根据样品物理化学特性、分离目的与设备性能，量身制定低速离心操作规程。通过分类参数设定、规范记录与定期维护，不仅能提升分离效果，还可延长设备寿命、降低实验成本，并为后续研究提供可靠基础。务必在每次离心前核对SOP，严格执行，以确保实验数据的准确性与可重复性。