低速离心机动物实验样品前处理如何离心？
一、前言
在动物实验中，离心分离是常见的样品前处理方法，可将细胞、组织碎屑、血浆或其他组分高效分离。本指南针对低速离心机（一般转速≤6 000 rpm，RCF≤3 000×g）的使用，结合多种动物样品类型，系统阐述离心前的准备、参数选择、操作流程与注意事项，力求兼顾效率与安全。
二、样品类型与预处理概述
全血样品
适用于血细胞、血浆或血清分离。
需先抗凝（常用EDTA或肝素），轻轻混匀，避免造成血细胞破裂。
组织匀浆
来自肝脏、脾脏、肌肉等，需用生理盐水或缓冲液冲洗，切成1–2 mm³小块后，在匀浆机或研钵中进行低温研磨。
细胞悬液
主要包括外周血单个细胞、骨髓细胞或培养皿收集的贴壁细胞，用PBS缓冲液清洗两次，以去除培养基或血清残留。
组织液与体液
如腹水、胸水等，先过滤粗大颗粒，再进行分层离心获得细胞组分与上清。
三、仪器与转子选型
离心机机型：低速台式离心机，配备可编程定时、温控与缓升降速功能。
转子类型：根据管子尺寸选择角转子或水平（摆动）转子。
角转子：离心效率高但剪切力大，适合常规沉淀；
摆动转子：分层界面平直，有利于梯度分离或上清提取。
平衡配重：同批次样品管应等量分装，同心放置，重量误差≤0.05 g。
四、离心管与容器选用
材质：常用聚丙烯（PP）或聚碳酸酯（PC）管，具有耐化学腐蚀和较高机械强度。
规格：1.5 mL、2 mL微量管适用于小体积样品，15 mL、50 mL锥形管用于组织匀浆或体液分层。
密封：确保盖子锁紧或使用带锁片的离心管，避免操作过程中松脱或泄漏。
五、温度控制与缓冲液配置
温度设定：常规选择4 °C离心，以保护热敏分子（如蛋白质、RNA）和减少酶活性。
缓冲液：配制PBS或Tris缓冲液时，注意 pH 7.2–7.4；必要时加入蛋白酶抑制剂、抗氧化剂或EDTA以稳定生物活性。
六、参数设定原则
| 样品类型 | 转速（rpm） | RCF（×g） | 时间（min） |
|---|---|---|---|
| 血浆/血清分离 | 1 500–2 000 | 200–400 | 10–15 |
| 全血白细胞 | 1 000–1 200 | 100–200 | 5–10 |
| 细胞沉淀 | 2 000–3 000 | 400–800 | 5–8 |
| 组织碎屑除悬 | 500–800 | 50–150 | 2–3 |
说明：上述参数仅供参考，实际需结合样品密度、体积与下游实验要求进行微调。
七、血液样品离心流程
采集与抗凝：采血后立即加入等体积EDTA抗凝剂，端管轻轻倒置三次混匀。
初次离心：将采集管置于角转子，1 500 rpm、RCF≈250×g、4 °C、10 min。
上清回收：用无菌移液器缓慢吸取血浆，避开白细胞界面。
二次清洗（如需）：血浆可再次稀释于PBS后避光轻柔旋转，去除残余血细胞。
样品保存：血浆分装于新管，立即置于–80 °C保存。
八、组织匀浆离心步骤
预处理：将新鲜组织切割后放入含缓冲液的研钵，用玻璃研杵研磨至可见细小颗粒。
粗滤：用70 μm细胞筛或纱布过滤，收集滤液于离心管。
初离心：500 rpm、RCF≈100×g、4 °C、3 min，去除未匀浆的组织块；弃去沉淀。
二次离心：2 000 rpm、RCF≈500×g、4 °C、5 min，收集沉淀（细胞或胞器）与上清分离。
次级分离（需时）：根据实验需求，可对上清再次植入梯度（如Percoll）中进行细胞器分馏，使用水平转子缓升速运行。
九、细胞悬液收集与纯化
制备细胞悬浮液：贴壁细胞用0.25%胰酶消化后，中和并用PBS漂洗两次。
平衡与配重：离心管内加入相同体积PBS，保证两侧重量一致。
离心参数：1 000 rpm、4 °C、5 min，收集细胞沉淀。
重悬与计数：沉淀用PBS或培养基重悬，轻轻反复吹打，使用血球计数板或自动细胞计数器评估存活率。
十、上清回收与样品固定
上清处理：大体积上清可通过真空过滤浓缩或超滤管回收特定分子；小体积上清直接分装。
固定/保存：需进行形态学分析时，可在沉淀中加入4%多聚甲醛固定10 min，4 °C离心后弃去固定剂，用PBS漂洗两次；若用于蛋白或核酸提取，则直接置–80 °C保存。
十一、离心机清洁与维护
日常清洁：每次使用后，用70%乙醇擦拭转子和腔体，晾干后再装回。
定期校验：每六个月进行转速、温度和制动速度校验，确保仪器性能稳定。
润滑保养：对转子轴承和密封圈进行标准润滑，并更换老化部件。
故障排查：若出现震动异常或温度偏差，立即停止运行，联系维修或参照说明书逐项检修。
十二、常见问题与解决
转速不足：检查电源电压、转子类型及平衡状态；如转子安装不当需重新锁紧。
温度偏高：核对制冷系统，补充制冷剂或清理散热风道；避免长时间满载运行。
样品溶液浑浊：可能因离心力过大导致细胞破裂，适当降低转速或缩短离心时间。
离心管破裂泄漏：确认管材适配性及上盖紧固力，必要时更换耐压离心管。
十三、实验室安全与注意事项
离心前务必平衡配对管，并检查转子是否有裂纹、老化或腐蚀痕迹。
操作时戴实验手套、护目镜和实验服，避免接触高温部件与飞溅液体。
离心结束后等待指示灯熄灭及转子完全停止，再打开机盖。
易挥发、有毒或病原微生物样品，必须在生物安全柜或通风良好环境中预处理，且采用符合 Biosafety 级别的离心适配器。
十四、总结
合理的前处理和离心参数能显著提升后续实验质量与重现性。低速离心机在动物实验中应用广泛，通过优化样品类型预处理、精确设定转速/RCF/时间及严格控制温度，可实现血液、组织和细胞样品的高效分离与纯化。同时，科学的清洁维护、定期校验及严格的安全措施，是保证设备稳定运行和实验人员人身安全的基础。掌握上述要点，将助力各类动物实验样品的精准离心与下游分析。
