一、引言：吸光度异常≠样品异常

紫外分光光度计（UV-Vis Spectrophotometer）是一种基于比尔-朗伯定律原理，通过测量溶液对特定波长光的吸收程度进行定量分析的设备。其核心输出指标是吸光度（Absorbance，简称A）。

在正常实验过程中，吸光度应随着浓度、路径长度、波长变化而呈现可预测的规律性。然而，有时即便使用空白溶液或低浓度样品，也会出现明显偏高的A值（如A > 2.0），甚至超出仪器测量上限。

此类现象不仅影响实验数据的可靠性，严重时甚至干扰科研结论或导致产品检测结果不合格。因此，理解并掌握吸光度异常偏高的根本原因，是仪器操作者与实验室管理者必备的故障识别与解决能力之一。

二、什么是“异常偏高的吸光度”？

正常范围参考：

• 多数紫外分光光度计的线性检测范围在 A = 0.1–1.5；

• 当A值超过2.0时，光强接近检测下限，读数可能失真；

• 空白样品或低浓度样品的A值应接近 0.0；

• 若A值远高于预期（如空白样A = 0.5 或样品A = 3.0），则为异常偏高。

表现形式包括：

• 空白样测出非零吸光度；

• 样品测定值远高于理论浓度对应A；

• 吸光度突然上升；

• 重复性变差，高值波动严重；

• 仪器报警“光强过低”或“信号饱和”。

三、吸光度异常高的可能原因分析（分五大类）

一、光学系统污染或遮挡

1. 比色皿污染或有水渍

• 手指触碰造成油脂膜；

• 水滴未干透导致透光不均；

• 残留沉积物导致光散射。

解决方法：

• 使用镜头纸或无尘布擦拭比色皿两面；

• 比色皿清洗后务必自然风干或用氮气吹干；

• 对照标准样进行背景对比判断。

2. 样品池窗口污染

• 光路透镜或窗口表面附着灰尘、盐渍；

• 旧样品溅入样品仓未清洁。

解决方法：

• 关闭电源后使用棉签与酒精清洁；

• 避免用硬物刮擦窗口表面；

• 可扫描空白样判断是否恢复正常。

3. 光源系统异常

• 氘灯或钨灯发光不均；

• 灯泡老化，造成光强不足；

• 灯泡未对准，光束偏斜。

处理建议：

• 检查灯泡累计使用时间；

• 听取启动音与观察发光亮度；

• 若A值高而光强极低，考虑更换光源。

二、仪器配置或校准失误

1. 波长设定错误

• 若使用非最大吸收波长测定，A值可能偏高或低；

• 波长偏移也会引发错误吸光读数。

处理建议：

• 查阅样品最大吸收波长；

• 执行波长校准（使用钬玻璃或标准物扫描）；

• 比较历史数据曲线判断偏差位置。

2. 比色皿放置方向不当

• 放置错误（如90°旋转）会遮挡光路；

• 使用损伤或不平整的比色皿也会引入偏差。

建议：

• 比色皿方向保持一致，光面朝向光路；

• 更换完整无划痕比色皿并重复测试。

3. 无空白校准或空白设置错误

• 忽略设置“参比”或未置入空白样品；

• 空白溶液本身有吸收，未扣除背景。

建议：

• 重新设置空白校准；

• 检查空白是否为纯溶剂，容器是否清洁。

三、样品自身问题

1. 浓度过高

• 高浓度样品会吸收全部入射光，导致信号饱和；

• 吸光度可能达到极限A = 3.0（透光率≈0.1%）。

建议：

• 进行系列稀释实验；

• 保持样品A值在0.1–1.0为最佳。

2. 颜色样品强烈吸光

• 有些样品如碘、锰酸钾等，在可见光区吸收强烈；

• 多波长重叠可能产生异常高吸收峰。

建议：

• 换用邻近波长测定或选择双波长法；

• 检查样品是否沉淀、反应或变色。

3. 样品混浊或含气泡

• 悬浮颗粒、蛋白聚集、乳状液会散射光；

• 气泡会阻碍光线直通，造成虚高。

处理方法：

• 离心、过滤或静置去除杂质；

• 加样时避开产生气泡；

• 可用声波震荡器除气泡。

四、电路与检测器故障

1. 检测器漂移或暗电流增高

• 电路老化导致信号异常；

• 检测器长期使用后灵敏度下降。

建议：

• 执行暗电流检测；

• 扫描空白曲线观察基线是否漂移。

2. 放大电路损坏

• 若吸收信号被异常放大，也会造成高值；

• 可引发读数跳变。

处理方法：

• 用标准物质验证仪器响应；

• 若不符，联系厂家检测放大电路或ADC模块。

五、环境与操作习惯因素

1. 实验室灯光干扰

• 室内强光或日照穿入样品仓；

• 造成背景信号偏高。

建议：

• 关闭样品仓门；

• 将仪器置于避光环境，避免靠窗位置。

2. 温度波动影响

• 仪器预热不足或环境温差大；

• 影响光源稳定性与样品吸收特性。

建议：

• 仪器开机预热30分钟；

• 尽量保持恒温操作环境。

3. 软件参数设置错误

• 比如未选择“吸光度模式”，或单位误用“%T”；

• 使用自动增益调节被关闭。

处理建议：

• 检查方法设置，核对量程与通道参数；

• 如有疑问可恢复出厂默认测量配置。

四、诊断流程建议（逻辑排查图）

swift复制编辑A值异常偏高 →├── 空白A是否正常？ ── 否 → 检查比色皿/光路污染/空白设置│                                ↓│                           清洁光路、校准空白后再测│├── 样品是否过浓或浑浊？ ── 是 → 稀释或预处理│├── 仪器光源/波长是否异常？ ── 是 → 更换灯源/执行波长校准│├── 比色皿方向或质量是否正确？ ── 否 → 调整或更换│├── 是否误操作或参数错误？ ── 是 → 检查软件设置/波长单位/模式│└── 排查后仍异常 → 可能为检测器或主板故障 → 联系厂家技术支持

五、常见误区与防错提醒

六、总结与建议

吸光度异常偏高是紫外分光光度计中一种常见但多源性的故障表现，其成因可涉及光学污染、样品因素、设置失误、硬件老化与操作习惯等多个方面。盲目调整浓度或重复测试往往无法根本解决问题，甚至掩盖潜在风险。

建议每位操作人员建立如下规范操作意识：

• 每次实验前完成空白与标准物验证；

• 保持比色皿洁净、统一方向；

• 控制样品浓度在0.2–1.2 A之间；

• 定期进行仪器校准与系统维护；

• 建立测量异常记录与分析机制。