一、为什么吸收标准曲线如此重要？

紫外分光光度计以朗伯–比耳定律为基础：

$$A=\epsilon cl$$

其中：

• A 为吸光度；

• ε 为摩尔吸收系数；

• c 为浓度；

• l 为光程。

标准曲线的作用就是将理论公式转化为实验可操作的标定关系，消除复杂溶剂基体、光源强度、温度、操作者误差等多种系统性偏移，使后续样品定量在可控区间内稳定可信。

二、标准曲线制作前的必要准备

1. 明确标准物质来源与纯度

**建议：**每批新购标准品均需记录纯度校准批文与供应批次信息，确保长期溯源可查。

2. 配制母液方案

• 溶剂选用：需与样品基体完全一致（溶剂、缓冲液、pH、电导、表面活性剂浓度一致）；

• 容器选用：优选玻璃 A 级容量瓶、紫外级吸头和枪头；

• 浓度精度：称量误差 ≤0.1 mg，配液误差 ≤0.1 mL。

3. 比色池准备

• 材质：石英比色池（适用 190-1100 nm）；

• 光程：常规 1 cm，微量测定用 0.05–0.2 cm；

• 状态：无气泡、无划痕、无挂壁，使用前乙醇+去离子水清洁擦拭。

4. 仪器状态确认

三、标准曲线设计逻辑与浓度区间确定

1. 设计目标：让浓度点落入朗伯–比耳定律近似线性区

2. 浓度梯度设计

一般推荐5~8 个浓度点，起始浓度覆盖检测限上限 20~120% 区间。

四、标准曲线配制实操步骤

1. 配制母液

• 准确称取标准品加入容量瓶；

• 加溶剂溶解（必要时可用超声辅助）；

• 定容、混匀、标注配制日期与操作者。

2. 梯度稀释

• 用校准移液器逐级配制各标准点；

• 稀释过程中用独立新吸头，避免交叉污染；

• 每次配液均应翻转混匀至少 10 次。

3. 空白准备

• 配制完全相同溶剂体系的“空白液”；

• 在仪器测试前先用空白液调零。

4. 上样顺序设计

• 推荐使用“递增–递减交叉法”上样：
  1→2→3→4→5→6→5→4→3→2→1

• 避免仪器短时间内逐渐漂移所带来的系统偏差。

五、标准曲线测定与数据记录

1. 测量条件设定

2. 测定过程

• 每一浓度点至少平行测量 2~3 次，取平均值；

• 样品测定前，每批次标准曲线需先完成并通过验证。

3. 数据记录格式建议

完整保存原始吸光度数据表以备审计与复核。

六、标准曲线计算与评估

1. 建立回归方程

• 采用一元线性回归：

  $$A=a\times c+b$$

• a 为斜率（灵敏度），b 为截距。

2. 统计参数要求

3. 检查线性区间

• 对于高浓度端若出现弯曲趋势，可舍弃高浓点后重做拟合；

• 线性区稳定性直接影响方法的可重复性和定量能力。

七、标准曲线的应用与日常维护

1. 使用时限

2. 监控方式

• 每批样品插入中浓度标准作为质控 (QC 样)；

• 若 QC 样偏离标准曲线预测值 > ±2%，则整批样品需重新测定。

3. 曲线更新频次建议

八、标准曲线失控的排查与修正

九、标准曲线在法规体系中的位置

十、智能化与自动化趋势

十一、结语

标准曲线不是仪器附属，而是紫外定量方法的灵魂标尺。

核心理念：

• 浓度设计要科学 → 线性区间稳定

• 稀释操作要精准 → 源头误差封堵

• 测定流程要一致 → 方法稳定性提高

• 曲线评估要严谨 → 数据合规可审计

当标准曲线制作规范化、流程化、数字化，紫外分光光度计便真正成为稳定、可信、合规的数据工厂，为药物研发、食品检测、环境监测、化妆品开发等领域提供高质量数据支撑。