一、为何浓度范围的选择如此重要？

紫外分光光度计基于朗伯–比耳定律：

$$A=\epsilon cl$$

其中，A 为吸光度，ε 为摩尔吸收系数，c 为浓度，l 为光程长度。
理论上 A 与 c 呈线性关系，但实际上该线性只在特定浓度区间内成立。超出此范围后，因光学和物理因素干扰，数据误差迅速放大。

浓度选择的目标就是让测量始终处于最佳线性区间内，确保：

• 测量线性良好

• 精密度高

• 灵敏度充足

• 准确度稳定

• 定量可靠

二、浓度选择受哪些因素控制？

三、浓度区间的基本设计逻辑

3.1 理论计算公式

c=Aεlc = \frac{A}{\varepsilon l}c=εlA

3.2 理想吸光度范围

四、浓度区间选择的实验流程设计

4.1 全谱预扫

• 扫描样品 190–800 nm，确定 λmax；

• 观察溶剂背景吸收区，避免共吸收干扰；

• 记录样品特征吸收波段，指导稀释量级。

4.2 ε 估算与初步浓度换算

• 查阅文献或前期实验获得 ε 值；

• 以目标 A 值（如 0.6 AU）代入公式预估浓度。

4.3 实验梯度配制

• 设计 30%；

• 等差法适合精密定量，等比法适合宽区间探索。

4.4 标准曲线测试

• 每点平行测定 2~3 次吸光度，绘制 A-c 关系；

• 计算回归方程与残差分布，确定线性有效区。

五、不同分析目的下的浓度选择案例

5.1 核酸测定（DNA/RNA）

5.2 蛋白测定（A280法）

5.3 药品含量测定

5.4 环境水质监测

六、浓度范围不当可能造成的误差类型

七、合理选择浓度的预防性策略

7.1 稀释优先

• 先稀释后测量，避免 A>1.5；

• 稀释比例统一，便于批次间数据可比。

7.2 光程匹配

7.3 溶剂优化

• 选用紫外级水、HPLC 级溶剂；

• 保持缓冲液 pH、离子强度一致；

• 过滤脱气，降低微粒散射。

7.4 温度控制

• 样品恒温 25 ℃±1 ℃；

• 避免温漂导致溶解度或气泡析出。

八、智能化辅助系统的发展方向

九、法规标准对浓度选择的参考指标

十、结语：浓度区间设计是一项系统工程

• 过高 → 自吸收、散射、非线性

• 过低 → 噪声放大、精度损失

• 合适区间 → 最终呈现优质标准曲线与定量结果

浓度区间的精准选择是紫外定量分析成败的核心保障，应结合：

• 方法学理论

• 实验设备性能

• 样品基体特性

• 操作习惯稳定性

浓度选得好，紫外测得稳，数据自然准！