一、基线校正：紫外分光光度计定量分析的“地基工程”

在紫外分光光度法中，仪器测得的吸光度不仅来自样品成分的吸收，还包括：

• 溶剂、缓冲液的吸收；

• 比色池自身的透光性影响；

• 光源与光学系统的背景光；

• 仪器电子部分的暗电流漂移。

基线校正的目的，就是消除这些与待测物无关的信号，让吸光度真正反映样品浓度。

通俗理解： 基线不稳，整个定量分析都像“歪斜的天平”。

二、基线校正的科学原理

紫外分光光度计依据朗伯-比耳定律：

$$A=\epsilon cl$$

但如果背景存在固定吸收B，实际为：

A测量=εcl+BA_{\text{测量}} = \varepsilon c l + BA测量=εcl+B

基线校正的实质： 将B扣除，使测量值回归真实吸光度。

核心思路：用“空白样品”代表仪器与基体贡献。

三、哪些因素会影响基线表现？

结论： 基线校正既依赖空白操作，也依赖整体实验状态的稳定。

四、基线校正的分类方法

五、标准基线校正流程（SOP范本）

步骤一：空白液准备

• 配方一致性：与样品溶剂体系完全相同（溶剂、pH、盐浓度、缓冲组分一致）。

• 纯度要求：使用紫外级水与高纯试剂。

• 气泡控制：超声或抽真空脱气，避免微气泡散射。

步骤二：比色池处理

• 70%乙醇清洗 → 去离子水漂洗 → 气流吹干；

• 检查池壁透明度，无挂液与刮痕。

步骤三：仪器预热

步骤四：设置调零

• 装入空白溶液；

• 单光束仪器 → 按“Blank”或“Zero”键；

• 双光束仪器 → 参考光路自动平衡，确认无差异提示。

步骤五：基线扫描（全谱仪）

• 设定扫描波段（如190–800nm）；

• 步长0.5–1nm，速度中等；

• 获取基线曲线用于后续校正与监控。

步骤六：基线合格性判定

六、常见特殊情况的基线校正策略

6.1 缓冲液共吸收

• 问题：缓冲盐如磷酸、硫酸盐在200–230nm有强吸收；

• 解决：使用缓冲液本身作空白液调零。

6.2 有机溶剂体系

• 问题：甲醇、乙腈在深紫外有本底吸收；

• 解决：高纯度溶剂，浓度与样品保持一致。

6.3 浊度样品

• 问题：散射光导致伪吸收；

• 解决：先澄清过滤，必要时作双波长散射扣除。

6.4 温控漂移

• 问题：检测器热漂移导致基线周期性波动；

• 解决：仪器恒温环境（建议20–25℃±1℃）。

七、基线异常现象诊断与快速排错

八、数字基线校正算法（高级应用）

8.1 扣除法

• 空白谱直接扣除样品谱；

• 适用于色彩强、背景复杂样本。

8.2 多项式拟合法

• 用低阶曲线拟合基线趋势后剔除；

• 适合缓慢漂移基线矫正。

8.3 滤波去噪法

• Savitzky-Golay平滑滤波；

• 保留峰形同时去除高频基线噪声。

8.4 AI智能算法

• 自学习识别基线形态；

• 适合复杂高通量、多批次自动处理。

九、法规要求中的基线校正要求

十、智能化基线管理的未来趋势

十一、结语

基线校正，看似简单，实则核心。

• 它不是操作仪器的前置程序，而是数据质量的防火墙；

• 它不仅关系单次测量结果，更影响长期批次间的稳定性与一致性；

• 它既要靠技术操作标准化，更需要借助数字化工具不断优化。

让基线始终纯净、平稳，是紫外定量真正“测得准、测得稳”的起点。
把基线管理写进SOP、训练习惯、纳入质控，是高水平实验室的重要标志。