一、浓度范围选择的重要性

紫外分光光度计的定量分析高度依赖朗伯-比尔定律：

$$A=\epsilon \cdot c\cdot l$$

其中：

• A = 吸光度；

• ε = 摩尔吸收系数（吸收强度）；

• c = 浓度；

• l = 光程长度。

浓度设置合理 → 吸光度稳定在线性区 → 定量准确可靠。
浓度设置失当 → 非线性失真 → 定量误差失控。

一句话：
浓度区间选得准，紫外数据才有生命力。

二、哪些因素决定合理浓度区间？

三、合理吸光度区间的确定逻辑

3.1 吸光度区间建议

3.2 浓度换算公式

c=Aε⋅lc = \frac{A}{\varepsilon \cdot l}c=ε⋅lA

控制思路： 通过调节稀释倍数、光程长度控制吸光度落入合理区间。

四、样品类型下的浓度设定参考

4.1 核酸分析（DNA/RNA）

4.2 蛋白分析

4.3 药品定量分析

4.4 环境污染物检测

4.5 食品添加剂监测

五、浓度区间设计的实践步骤

5.1 预扫光谱定位λmax

• 全谱扫描190–800 nm；

• 确定主峰波长λmax；

• 避免邻近强背景吸收干扰。

5.2 ε系数查阅或估算

• 查阅文献或厂家技术资料；

• 如无资料，可做单点定量估算ε值。

5.3 初始浓度设定

• 以目标吸光度0.6 AU为理想设计点；

• 反推所需浓度初始值。

5.4 梯度设计逻辑

标准曲线一般建议配制5–8个浓度点。

六、浓度范围设定失误带来的典型误差

七、调节浓度区间的实用技巧

7.1 先稀释后上机

• 首次测试浓度务必稀释1/10尝试；

• A>1.2即视为浓度过高需进一步稀释。

7.2 配合光程调节

7.3 温控平衡稳定性

• 稳定温度 20–25℃平衡后上机；

• 防止热释气泡或析出沉淀影响光程一致性。

八、智能化浓度区间设定辅助工具

九、浓度区间控制与方法学验证关系

浓度区间设计 = 方法学验证是否顺利通过的关键。

十、法规合规体系对浓度区间的要求

十一、浓度设定典型错误案例与纠偏策略

十二、浓度区间设定背后的核心逻辑总结

• 浓度合理 → 吸光度线性 → 曲线拟合优秀 → 定量数据稳健；

• 浓度不当 → 信号漂移 → 结果波动 → 方法不合规；

• 浓度选得好，几乎解决了紫外定量95%以上的核心难题。

浓度区间设定，是紫外实验室方法学设计能力的直接体现。