1. 单波长检测

单波长检测是最基本的设置，选择样品在特定波长下的最大吸收峰进行测量。常见的波长包括：

• 450 nm：适用于TMB底物的ELISA检测。

• 492 nm：适用于OPD底物的ELISA检测。

• 405 nm：适用于PNPP底物的碱性磷酸酶反应。

• 562 nm：适用于BCA法的蛋白定量。

• 595 nm：适用于考马斯亮蓝法的蛋白定量。

单波长检测操作简便，但易受样品中杂质或微孔板底部污染的影响，可能导致背景干扰。

2. 双波长检测

双波长检测通过测量两个波长的吸光度，计算其差值，以减少非特异性吸收的影响，提高检测的准确性。常见的波长组合包括：

• 450 nm / 630 nm：适用于TMB底物的ELISA检测，630 nm用于校正背景。

• 492 nm / 620 nm：适用于OPD底物的ELISA检测，620 nm用于校正背景。

• 405 nm / 650 nm：适用于PNPP底物的碱性磷酸酶反应，650 nm用于校正背景。

双波长检测能有效减小微孔板孔间差异、光路污染等因素对结果的影响，推荐在高精度要求的实验中使用。

3. 多波长检测

某些复杂样品或多组分分析需要使用多波长检测，通过测量多个波长的吸光度，结合数学模型进行数据分析。例如：

• 340 nm / 380 nm / 450 nm：用于NADH/NAD+比率的测定。

• 260 nm / 280 nm：用于核酸和蛋白质的纯度分析。

多波长检测适用于需要同时分析多个组分或进行复杂数据处理的实验。

4. 吸收比率设置的注意事项

• 选择合适的波长：根据底物的最大吸收峰选择主波长，参考试剂说明书或文献资料。

• 校正背景干扰：使用参考波长进行背景校正，减少非特异性吸收的影响。

• 定期校准仪器：确保酶标仪的波长准确性和光学系统的稳定性。

• 使用合适的微孔板：选择适用于所选波长范围的微孔板，避免材料对测量的干扰。