
酶标仪光学系统一般采用哪些透镜和滤光片?
一、透镜体系——从光源到探测器的能量调度者
平凸透镜(Plano-Convex Lens)
平凸透镜是在酶标仪中出现频率最高的成像元件之一,尤其适用于把发散光聚焦到微孔板底部或从样品处收集光线并准直。它通常选用低杂质BK7或熔融石英材料以兼顾成本与紫外-可见区透过率,曲面面向光源或样品,平面面向准直空间可有效抑制像差。双胶合消色差透镜(Achromatic Doublet)
对于需要覆盖波长 200–800 nm 的多模态检测仪,单片球面透镜的色差难以满足定量需求。采用“短焦 Flint 玻璃 + 长焦 Crown 玻璃”胶合的消色差双联透镜可以使两种主要颜色在同一焦面成像,显著提升吸光度扫描和荧光强度测量的线性度。非球面透镜(Aspheric Lens)
为了缩短光路、降低透镜数量以及减轻装置体积,近年不少高端机型在入射聚光或出射准直环节引入模压或CNC抛光的非球面透镜。非球面可以在单片元件内同时校正球差、慧差与场曲,配合高精度 AR 镀膜,既减少能量损耗又压缩装机空间。柱面透镜 & 场镜(Cylindrical & Field Lens)
为了优化微孔板行方向与列方向上的照明均匀性,有时会在光路中嵌入柱面透镜进行单轴聚焦,使光斑与孔径匹配;而场镜则放置于物方或像方共轭平面处,扩大系统数值孔径 (NA) 并抑制孔间信号串扰。光纤耦合透镜(Fiber-Coupling Lens)
在顶读式荧光检测模组里,LED 或激光器发出的光常经玻璃或硅基板打磨的微型准直透镜,随后通过 SMA、FC 等接口耦合进多模光纤,再由探测端 GRIN 透镜或微型凸透镜重新整形。光纤化设计带来更灵活的多通道布线与热隔离优势。梯度折射率透镜(GRIN Lens)
GRIN 透镜依靠玻璃内部折射率沿径向渐变获得近似抛物面的聚焦能力,可在极短长度内实现 1/4 或 1/2 波片相位延迟,对空间受限的便携式读板机尤为重要。镀膜与材料考量
透镜外表面的增透镀膜(AR)常用 MgF₂ 单层或多层氧化物分级膜系,根据波段定制中心波长与最小反射率 (<0.5 %);深紫外 230 nm 以下应用需要采用熔融石英或钙氟光学晶体以避免紫外吸收。高功率 LED 激发模块还需关注基底热导率与热膨系数匹配,以防焦点漂移。
二、滤光片与分色装置——谱带选择与杂散光抑制的关键
多层干涉带通滤光片(Band-Pass Interference Filter)
带通滤光片由数十层高低折射率薄膜构成,通过级联 Fabry-Pérot 腔产生陡峭的透射峰与深截止带,是 ELISA 吸光度测量 450 nm/620 nm、蛋白浓度定量 562 nm、细胞活力检测 570 nm 等固定通道的首选。光带宽度 (FWHM) 往往控制在 5–10 nm,滤光片工业上多安装在高速旋转滤轮或线性滑台中。短波通 / 长波通滤光片(Short-Pass & Long-Pass)
荧光检测需要分隔激发光与发射光。常用组合为:激发短波通(SP)+ 发射长波通(LP),交叠处由二向色镜(Dichroic Mirror)精确分色。举例来说,FITC 通道可配置 480 nm SP 激发片与 520 nm LP 发射片;其阻带光密度 OD≥6 可把残余激发光抑制到 10⁻⁶ 级别。二向色镜(Dichroic Beam-Splitter)
二向色镜在 45° 入射下对特定截止波长 λc 形成“低于 λc 反射,高于 λc 透射”的转折,实现 L 形光路。其膜系设计与带通滤光片类似,却需兼顾入射角色移效应。优质二向色镜的转折区宽度<5 nm,可确保荧光与荧光共振能量转移 (FRET) 实验信噪比。中性密度衰减片(Neutral Density Filter, ND)
当检测动态范围跨越 4–6 个数量级时,单纯缩短积分时间易降低信噪和线性度。插入 ND1、ND2 等光密度可调滤片能在不改变谱形的前提下均匀衰减光通量,使高浓度样品仍落入 ADC 的线性区间。偏振滤光片(Polarizer/Analyzer)
在特定偏振荧光、各向异性 (anisotropy) 或 TR-FRET 仪器中,钙钛矿或聚合物基偏振片被置于激发通道与发射通道,以量化旋转弛豫。它们需要高消光比 (>10³) 并可承受 LED 功率密度达到数百 mW/cm²。滤光片机电结构
传统酶标仪一般采用 圆盘滤轮:单电机驱动、编码器定向、最多容纳 8–16 片 25 mm 直径滤片;近年亦涌现 矩阵滑台 或 磁吸快换盒,支持上百片光学元件的随机访问,满足谱扫描与多模式并测需求。
三、光学系统设计要点与元件选型原则
通光孔径与数值孔径匹配
透镜焦距与孔径需满足 f/# ≤ (1/2NA),方能在限定机身高度内保证光功率利用率。对于空底板底读模式,NA ≥0.3 能显著提高微孔间的光采集效率。焦深与孔间距离折中
96 孔板孔心距 9 mm,而 384 孔板仅 4.5 mm。设计时通过增设场镜或小焦距非球面透镜放大视场,以兼顾全板扫描与相邻孔光串扰 (≤0.2 %)。波段覆盖与带宽
如果需同时检测蛋白偶联酶反应 450 nm、DNA 吸收 260 nm 以及近红外荧光 700 nm,就必须在滤片轮里配置多簇光学组合,或干脆选用双单色仪型酶标仪。单色仪以双光栅 Czerny-Turner 结构居多,可实现 1 nm 步进谱扫描,但分辨率受狭缝宽度与散斑噪声制约。热漂移与机壳散热
高亮度 LED 工作时 junction 温度可接近 100 °C,热量经铜基板传至透镜可能引发焦距变化 (dn/dT) 与光轴漂移。设计上需在 LED-透镜之间加入陶瓷隔热垫并布置主动风冷,或者把光源移至远端,用光纤耦合至探头。防尘与可维护性
透镜、滤光片一旦被粉尘或试剂气溶胶污染,会导致散射光上升、背景噪声增大。多数厂商在光学仓内部署 正压洁净风道 与 抽屉式模组,方便实验室环境下快速更换滤片与擦拭透镜。
四、实例配置示范(吸光度 + 荧光双模式)
光源:250 nm–850 nm 氙闪灯 + 470 nm、525 nm、640 nm 高功率 LED 模块
激发侧透镜组:LED 前端 10 mm 直径非球面塑料透镜 → φ9 mm 柱面透镜均匀化 → L=35 mm 平凸 BK7 聚焦透镜
分色器: 505 nm 切换式二向色镜 + 495/10 nm 带通激发滤光片 → 光纤 400 µm 芯径耦合
采集侧透镜组:GRIN 0.23 Pitch 透镜 → 10 nm FWHM 发射干涉滤片 → 25 mm 焦距消色差双胶合透镜 → PMT
辅助 ND 组件:滤片轮内置 OD0.3 / OD1.0 / OD2.0 中性密度片三档,供高亮样品自动切换
机械:双层滤轮结构,上层 8 位置带通片,下层 8 位置发射片;步进电机+光门编码反馈,切换时间 80 ms
五、结语
透镜与滤光片是酶标仪光学系统中最为关键的“硬件关口”,它们的选型既决定了光能量的传输效率,也影响了波长分辨率、灵敏度、杂散光抑制与长期稳定性。从平凸、双胶合到非球面、GRIN;从带通、长短波通到二向色、中性密度,各类元件在不同检测模式下各司其职、环环相扣。只有充分理解它们的材料特性、光学参数与机电整合要求,才能设计出信噪比高、动态范围宽、通道切换快速且易维护的现代化微孔板检测平台。希望本文对读者掌握酶标仪光学系统的透镜与滤光片配置有所裨益,也为实验室选购或工程研发提供系统化的参考。
