1 化学析晶型堵塞——溶液配比与停机处理不当

1.1 高盐／高浓缩洗液直接使用

许多实验室为了节省空间把 10× PBS、Tris-HCl 库缓冲或磷酸盐洗液原液直接接到洗瓶，泵送过程中水分蒸发、温度波动或与残余洗液互混，会先在管壁形成盐膜，再逐渐长成晶簇，最常见的是磷酸钠、氯化钠或醋酸钠结晶。堵塞初期表现为回吸声增大、压差报警；若继续运转，步进泵噪音升高、末排孔冲洗不足。Accuris MW9600 手册特别提醒“不可使用未稀释浓缩盐液，停机前务必执行 Rinse 循环” 

1.2 “停机即断电”导致的干涸结晶

操作员完成最后一块板后直接关闭电源而不做排空／吹干，残液随夜间温度下降在针头和微孔形变区内汽化析晶；翌日开机即出现压力不足或某一列喷针不出液。Thermo Wellwash 手册将此列为最典型故障之一，并建议“下班前至少运行两遍空负载冲洗” 

1.3 跨缓冲体系无过渡冲洗

把含 Ca²⁺/Mg²⁺ 的 HBSS 溶液切换到磷酸盐体系，如不先以纯水过渡，可瞬间生成磷酸钙、磷酸镁沉淀；若再叠加 Tween-20 等表面活性剂，会形成黏稠乳胶，极易在弯头和 Y 型接头聚集。

2 有机与蛋白污膜型堵塞——高黏度试剂的“隐性垢”

2.1 含蛋白试剂久置

酶联实验常把含 BSA 或牛奶封闭剂的洗液装入 2–4 L 废液瓶反复循环。蛋白遇到泵压剪切、空气氧化后会变性附着管壁，日积月累形成乳白膜，肉眼难辨却能使管径逐年变细。

2.2 表面活性剂累积

CCK-8、CellTiter-Blue 等试剂含 0.05–0.1 % Tween-20 或 NP-40；若只用去离子水冲洗，残余的聚山梨酯会与硬水离子生成黏胶堵头。用 50 ℃ 温水加 0.5 % NaOH 循环 5 min 可溶解该类堵塞。

3 微生物生物膜型堵塞——“静置三天胜过坏水质”

3.1 敞口储液桶 + 室温孵菌

未经紫外或过滤灭菌的自来水在桶内静置 48 h 后即可检测到细菌总数 >10⁴ CFU mL⁻¹。细菌与真菌在壁面分泌 EPS （胞外多糖），形成柔韧而难以冲掉的生物膜。早期表现为喷针末端挂丝状“水藻”，后期直接堵死针孔。Biotek 维护指南建议“周末前全系统 70 % 乙醇浸泡，周一纯水冲洗”

3.2 低温停机霉斑

北方冬季夜间空调关闭，机内温度降至 10 ℃，多数细菌活性下降而霉菌繁殖，被忽视的黑色霉丝常在硅胶管与不锈钢接头交界处聚集，后续高温再启动会脱落成块，瞬间堵塞狭缝。

4 颗粒／悬浮物型堵塞——“看不见的固体累加器”

4.1 磁珠、荧光珠洗涤流程未切换釆样头

细胞学高通量筛选常用磁珠洗板；若结束后直接跑常规 ELISA 而未将吸液头切换至大孔径模式，残余磁珠在负压吸力作用下冲进主液路，数次循环后堆积成柱。

4.2 自来水硬度高引入碳酸钙

直接用自来水冲洗不仅带来沙粒，更重要的是水中 CaHCO₃ 受加热灯升温分解释出 CaCO₃ 微晶，附着在泵阀膜片后形成“白垢”。

4.3 空气泡夹带纤维

液面探针若因校准漂移提前抽空气，蓬松的泡沫把孔内纤维蛋白或纸屑裹入管路。由于纤维韧性高，即使用高压反洗也难以打散。

5 机械与操作习惯型堵塞——“人手动作决定寿命”

5.1 弯折与过度扎带

更换硅胶管时为了布线整齐常用扎带将多根管束固定并 90° 折弯，尖角处内径缩小，长时间泵压会促使沉积物在此“堵塞播种点”处率先粘附。

5.2 吸液深度设定过低

为追求残液 ≤5 µL，有人把吸头探入板底 0.2 mm，稍有孔底沉淀即被吸走；沉淀在流速骤降的废液端聚集，最终堵塞负压滤杯。

5.3 未及时更换空气滤芯

带压泵组上游常有 0.2 µm 空气滤芯，若一年以上未更换，会在滤芯破损瞬间释放积存尘埃至液路，造成多点堵塞。

5.4 使用含氯漂白液后未彻底冲洗

部分实验室用 5 % 次氯酸钠做消毒，氯离子与不锈钢针头发生点蚀，剥落的铁锈片被吸入硅胶管，形成二次污染；同时氯气残留会加速硅胶老化剥屑。

5.5 长时间低流速模式

为防止细胞脱落，一些方法把冲洗流速设至 0.5 mL s⁻¹ 以下；低剪切导致颗粒沉降速率 > 水流携带速率，管底逐步积沙样沉渣。

6 低温/环境因素型堵塞——“结晶学实验的翻版”

6.1 室温骤降引发缓冲盐析

磷酸盐体系在 4 ℃ 左右对钠盐的溶解度显著下降；冬季夜间气温骤降，周一早上刚开机即可能发现针头晶透。

6.2 湿度大引起吸头冷凝

梅雨季室内相对湿度 >80 %，冷空调直吹金属吸头，表面冷凝后夹带空气粉尘，干燥成壳堵孔。

7 如何针对性预防

1. 洗液管理：全部使用 1× 工作浓度溶液；跨缓冲体系时用纯水过渡 2 min；每周丢弃剩余洗液并擦洗桶壁。

2. 停机流程：至少执行两遍 Rinse → Purge → Air Dry；周末或长假前循环 70 % 乙醇 15 min。

3. 定期化学清洗：

• 月度：50 ℃ 0.5 % NaOH → 纯水；

• 季度：1 % 柠檬酸或 EDTA 去垢 → 纯水；

• 若有生物膜征兆，加 0.05 % 过氧乙酸或 0.5 % H₂O₂。

4. 机械维护：半年检查并更换滤芯、废液杯网；每年更换所有硅胶软管并重新校准液面探针。

5. 操作培训：禁止把吸头插入孔底，保持 0.5 mm 间隙；冲洗流程完成后方可关机断电；禁止使用自来水直接冲洗。

结语

管路堵塞往往是多因素叠加的“慢性病”，与化学析晶、蛋白污膜、微生物生长、颗粒累积及机械弯折等操作细节高度相关。严格的洗液配比管理、停机冲洗流程、周期性化学除垢和部件更换，能够把堵塞概率控制在可忽略水平；一旦发生堵塞，应根据堵塞物性质选择热碱、螯合剂或机械通条等组合方式，并记录在仪器维护日志中，持续优化 SOP，方可让洗板机保持持久、稳定、高复现性的工作状态。