洗板机如何避免负值孔出现？
在 ELISA 与化学发光平台中，吸光度或发光值低于空白的孔位被口语化为“负值孔”。其本质是样品信号在读取时小于参考基线（Blank、背景或暗计数）。若排除读板仪零点漂移，导致负值孔的因素几乎都与洗涤不足、洗涤过度或局部残液异常三个情景有关。以下以防控流程为核心，自上而下提供一套“不出现负值孔”的系统方案
一、方法学预审：确保标准曲线容差
空白构建：在方法学验证阶段，通过多批次高纯度空白基质确认“理论零”区间，将 Reader 噪声、洗板残液与试剂自发色贡献全部囊括，设定 Baseline 上限。
吸光度动态裕度：确保最弱阳性 OD 至空白差值 ≥0.15–0.20；若动态区间过窄，再小的负偏差就可能翻转为负值孔。
二、洗液配方与储存管理
缓冲强度：碳酸盐或磷酸系缓冲液应维持>10 mM，以抵御小体积残液稀释造成的 pH 波动。
表面活性剂浓度：Tween-20 过高可增泡导致虹吸失败；过低则解吸弱。推荐 0.01%–0.05% 动态区实验并锁定佳点。
储液桶遮光抗菌：微生物繁殖生成胞外多糖会堵塞阀岛，洗液量骤减，暗藏负值孔风险。
三、设备结构与选型要点
针阵布局：优先选用同心圆“1+8”式（中吸外喷），比并排式更少留涡流死角。
真空控制方式：电子阀闭环调压优于恒速泵——负压波动 < ±3 kPa 可显著降低孔间残液差异。
分区流道：高端机将 96 孔分割为 4 × 24 的小回路，一回路故障仅影响局部，不至于整板负值。
四、核心参数调优逻辑
| 关键参数 | 调节策略 | 风险指征 | 经验值范围 |
|---|---|---|---|
| 注液体积 | 初期设≥孔容 1.5 倍，再按残液抽检微调 | 过小→不洗净；过大→样品稀释 | 300 µL（96H板） |
| 浇注流速 | 梯度法筛选气泡 ≤10% | 气泡多或冲跨细胞 | 2–3 mL/s |
| 吸液高度 | 逐步下探至出现刮底痕迹再回退 0.3 mm | 刮底、细胞脱落 | 孔底+0.5 mm |
| 浸泡时间 | 阈值法：信号 CV% 收敛即停止增加 | 浸泡过短/过长 | 30–60 s |
