洗板机适合用于血清类样本吗？
一、血清样本的物理化学特征
血清中含有大量白蛋白、免疫球蛋白、脂质及多种微量补体，表面张力较纯化缓冲液低，易在孔壁形成粘附膜；黏滞度高于水，流速同等条件下排空效率偏低。此外，样本经离心分离后仍可能夹杂纤维蛋白丝，一旦干涸更易固着于孔底。因此洗板程序必须兼顾强力剪切与温和排液两种看似矛盾的要求——既要将高粘度残液冲走，又避免产生泡沫或蛋白变性。
二、洗板机流体系统对血清的适配要点
高流量双泵设计
新一代设备采用加压喷淋与负压抽吸独立回路，允许冲洗流速大幅提升至1.0 mL s⁻¹以上，以提供足够动能剥离蛋白膜。可编程脉冲模式
对血清类板可启用“冲–停–吸”短周期脉冲，以防连续大流导致孔液翻涌，造成交叉飞溅。渐进式Z轴吸液
通过阶梯吸液深度，让吸头逐层下探；前两段高速抽空大体积液体，末段低速贴底排走残滴，可将残液量降至 ≤0.3 µL。喷头防污染涂层
采用疏水氟化或陶瓷涂层减少蛋白吸附，并便于后续在线消毒。
三、参数设置对清洗效果的影响
| 参数 | 推荐范围 | 技术要点 |
|---|---|---|
| 冲洗体积/循环 | 300–400 µL × 4–5 次 | 流速递增设计，后两次可用温缓冲液 |
| 抽吸速度 | 250–400 µL s⁻¹ | 高速可能形成泡沫需动态调节 |
| 吸液深度 | 孔底上方0.1–0.2 mm | 避免刮擦孔底，降低残液 |
| 震荡时间 | 5–10 s （视板型而定） | 轻震防止高浓度蛋白黏附 |
四、交叉污染与残留酶风险
血清样本通常含有内源性酶、补体及微生物碎片，若喷头内部残留未被彻底清除，会在下一板造成假阳性。有效策略包括：
在板间加入“过渡洗”—使用含0.05% Tween-20 的PBS快速冲洗一次；
定时运行高盐或低浓度NaOH管道冲洗（每50-100板进行一次）；
选配带**“喷头内壁冲刷”**的机型，利用封闭回路对喷头内部进行逆流清洗。
五、血清样本常见实验场景与验证结果
HBsAg/抗-SARS-CoV-2 抗体 ELISA
实验表明，采用五次冲洗、两段吸液的强化方案，空白孔平均OD背景维持在0.05以下，阳阴对照分离度（S/N比）提升约18%。自身免疫抗体 CLIA
使用磁珠板时，血清中脂质易包裹磁珠；高速冲洗结合磁力保持功能，可使磁珠回收率大于99%，阴性孔RLU稳定。细胞因子多重检测
改装的双喷头洗板机在384孔U底板上对血清基质样本清洗后，CV值由未清洗的12%降低至2.5%。
六、维护与耗材管理
喷头定期浸泡蛋白酶液：拆卸后在37 ℃、1 h浸泡，分解附着蛋白；
硅胶/聚烯烃管路更换周期：高蛋白负荷环境下建议半年更换一次，以防生物膜滋生；
在用清洗液：选用含非离子表面活性剂的专用血清清洗剂，可显著降低背景。
七、法规与质控要求
临床机构应参照CLSI GP22-A3与ISO 15189：
对洗板机进行方法验证（残液率、交叉污染率、板间变异），并保存报告；
使用带电子记录功能的机型，对冲洗参数、清洗次数与操作员ID进行日志追溯；
定期用带色素或荧光示踪剂的验证板监测残留，确保≤0.5%孔间迁移。
八、常见误区与纠偏
| 误区 | 正确做法 |
|---|---|
| “冲洗越多越好” | 过度冲洗可能稀释特异信号，应根据实验学验证设定 |
| “吸头贴底越紧残液越少” | 过低吸液深度易划伤孔底或吸入样本沉淀 |
| “用水冲就足够” | 血清蛋白和脂类需配合表面活性剂才能彻底去除 |
