一、理解设备特性：基础是精准操作的前提

1. 微孔板离心机的结构特点

微孔板离心机设计用于快速稳定地离心标准规格的微孔板（通常为96孔、384孔及qPCR板）。其特点包括：

• 垂直短程加速/减速系统：适用于微量样本的瞬间沉降。

• 封闭式腔体：需严格防止样本飞溅。

• 紧凑结构：一般不适合处理过深的孔板或异型板。

2. 移液器种类及其使用差异

移液器分为单道与多道两类：

• 单道移液器：用于精准控制单孔的加样量，适用于样本浓度梯度设定。

• 多道移液器（通常为8道或12道）：用于多孔同步移液，节省操作时间，是微孔板操作的主要工具。

因此，熟悉设备的物理参数（如孔板高度、吸头长度、液面深度）对于精准移液与安全离心至关重要。

二、使用前的协调准备：设备匹配与环境控制

1. 孔板兼容性确认

在移液操作前，应确保微孔板符合离心机转子槽的尺寸：

• 使用标准ANSI/SBS规格的96孔或384孔板；

• 避免使用带裙边或不规则边框的板型，否则可能在离心时引发不平衡或卡壳；

• 确保板体硬度足够，避免移液时因挤压变形导致离心不稳。

2. 吸头长度与穿刺深度匹配

为防止加样不精准或损伤孔底：

• 吸头插入液体的深度应为孔深的1/3—1/2；

• 使用专用微孔板吸头，其长度应与微孔板深度匹配；

• 避免将吸头接触孔底造成划伤。

3. 实验环境控制

移液与离心操作应在以下环境进行：

• 无尘台或生物安全柜内；

• 温度控制在20–25℃范围；

• 湿度适中，避免气泡影响液体精度；

• 防振动平台，确保移液稳定。

三、操作过程中的注意事项

1. 装板操作：避免气泡与溅洒

装板是关键步骤：

• 保持孔板水平放置；

• 加液过程中移液器应沿孔壁缓慢注入，减少气泡产生；

• 避免加样过快导致样本飞溅至孔口；

• 多道移液器操作前应在非正式孔板上预训练，以校准姿势与压力控制。

2. 液体体积控制：防止溢出与损失

微孔板每孔容积通常为：

• 96孔板：最大约300μL；

• 384孔板：最大约120μL；

• 实验中应保持装液不超过总容积的80%，防止离心时溢出。

建议在移液后短暂停顿2–3秒，让液体稳定在孔中再移除吸头，减少液滴残留。

3. 离心准备：密封、平衡与排气孔检查

离心前必须做到：

• 使用封板膜封闭微孔板口，选择离心适用膜，避免起鼓或破裂；

• 保证双板对称放置，重量差不得超过0.01g，确保腔体平衡；

• 如孔板底部带排气孔，应确认是否遮蔽，防止离心过程中压强变化导致孔膜破裂。

四、配合流程优化：提升效率与精准性

1. 操作顺序优化建议

常见流程如下：

1. 移液器装样（控制温度与均一性）；

2. 封板；

3. 微孔板离心（短时间，约30–60秒）；

4. 离心结束后开盖，吸头吸取上清或进行混合。

整个流程中，应避免频繁转换板体位置与方向，以减少人为误差。

2. 时间控制与样本稳定

• 样本如为蛋白或细胞，建议控制在离心前不超过15分钟完成移液操作，防止样本沉降；

• 对挥发性强或易氧化的样本，应在完成加样后尽快离心并进入下一步处理。

五、误差防控策略：确保实验准确性

1. 移液精度影响因素

• 吸头安装是否到位；

• 手柄按压是否有弹性疲劳；

• 使用前应进行校准检查；

• 不同液体（如有机溶剂）可能影响吸头吸附性能。

建议每次使用新吸头，并在使用多道移液器时确认所有道口吸力一致。

2. 孔间交叉污染防范

• 加样顺序尽量统一由左向右、由上至下；

• 吸头不可重复使用于不同孔；

• 高风险样本使用滤芯吸头；

• 封板膜使用后不可复用。

3. 离心偏心与微量溢出判别

• 每次使用后观察内腔底部是否有飞溅痕迹；

• 若发现异常声音或偏心振动，应立即停机检查转子与板体对称性；

• 离心完毕后检查封膜完整性，有破裂需重新分装。

六、安全防护措施

1. 个人防护配备

• 使用时需戴好手套、实验服；

• 操作挥发性或病原性样本时，佩戴护目镜与口罩；

• 高风险实验推荐在生物安全柜内进行全流程操作。

2. 应急处理

• 溅液处理：立即用RNase/DNase free纸巾擦拭，用75%酒精消毒；

• 离心过程停电或异常停机：勿强行开盖，等待系统自行解锁；

• 吸头卡滞或样本溢出：暂停操作，彻底清洁后再运行下一组样本。

七、设备维护与操作日志

1. 移液器日常维护

• 每周进行吸头接口与内部活塞清洁；

• 每季度进行一次体积校准；

• 储存在干燥架上，避免密封环境导致弹簧氧化。

2. 离心机内腔定期清洁

• 使用无尘布配75%乙醇擦拭；

• 每月检查转子平衡性与运转噪声；

• 建议使用后每3天记录一次清洁与异常状况。

3. 使用记录与追溯管理

• 为移液器和离心机分别设置使用日志；

• 记录每次实验操作的时间、人员、样本批次与异常情况；

• 有助于后续问题追踪与责任划分。

八、典型应用场景与操作建议

九、未来趋势与集成技术

1. 自动化集成平台协同控制

• 微孔板离心机与移液工作站正在朝智能平台融合发展；

• 可通过软件预设操作顺序、自动分配孔板、设定离心参数。

2. 智能识别与液量监控

• 新型移液器具备样本检测模块，可校准实际液量；

• 离心机通过传感器判断样本平衡性与液位波动，提高安全性。

3. 教学系统与模拟操作平台

• 高校已开发配套的VR教学模拟平台，让初学者在虚拟环境下模拟移液与离心流程，降低培训成本与设备磨损。

结语

微孔板离心机与移液器虽为基础实验设备，但在复杂实验流程中扮演着决定实验成功与否的重要角色。两者配合使用的每一个细节，从孔板选择、吸头匹配、操作顺序、液体体积控制，到后期设备清洁与数据记录，都对实验的准确性与可重复性产生深远影响。通过建立标准化操作规范、注重人员培训与设备保养、结合自动化技术与智能化趋势，实验室能够大幅提升操作效率，降低差错风险，并为高质量科研和临床工作提供坚实基础。