一、引言与适用范围 

• 目的：确保培养箱内部无菌环境，防止污染，并符合实验室GMP、BSL‑2级别安全要求。

• 适用对象：所有 Forma 311 直接加热 CO₂ 培养设备，特别用于涉病原体或高纯度细胞培养。

• 适用人员：受过无菌操作培训且熟悉化学、生物安全规范的实验人员或维护技术员。

二、消毒与灭菌的分级简介

本指南将流程划分为三类操作，配合不同需求和污染等级：

1. 日常消毒：适用于一般维护场景，频率建议为每日或频繁使用后。

2. 定期深度消毒：推荐每月阶段性执行一次，包括残留污渍和潜在生物污染清除。

3. 彻底灭菌：结合高温灭菌循环（Dry Heat / Steri-Run）消除内腔所有微生物，包括孢子及病毒，适用于新菌株接种前后或疑似交叉污染后。

三、准备工作与安全防护

• 关闭设备：断开电源、关闭CO₂气体供给，确认无运行状态。

• 室温条件：待培养箱降至室温以避免热损伤。

• 人员防护：穿戴实验服、手套、防护眼镜，处理病原体时加配口罩/面罩。

• 化学试剂：使用符合生物安全标准的低毒性消毒剂（推荐70% 乙醇、0.5% 過氧化氢、Quaternary Ammonium 等）。

• 通风与废弃物：在通风柜或生物安全柜下操作，使用专用容器或黄色生物废弃袋回收擦拭布、滤纸等污染材料。

四、日常清洁–步骤详述

1. 开启内门操作区域
   佩戴防护手套与专用无纺擦布。

2. 擦拭内壁及门封条
   使用适量70%乙醇或过氧化氢溶液，重点清洁内壁、玻璃门、操作界面。

3. 取下并清洁放板支架／湿度盘／CO₂端口过滤器
   用消毒液浸泡并擦净风道或湿度水盘，消毒后晾干或用无菌滤纸吹干。

4. 清理传感器与样品架
   用棉签轻沾消毒液，擦拭CO₂传感器玻璃及加热器表面，确保无液体残留。

5. 清洁HEPA滤网外壳接口
   使用清水或75%乙醇擦拭可触及的表面，勿拆卸滤芯本体。

6. 复原所有组件
   确保所有装置干燥完毕后，按原位安装。

7. 通风干燥
   关闭内门，仅保留外门开启1–2分钟，加速挥发残留液体。

8. 复电重启
   重新接通电源与供气，设置运行参数（37 °C，5% CO₂），待稳定后投入使用。

五、月度深度清洁流程

在日常步骤基础上额外：

• 拆卸所有可拆组件：样品架、角码、加湿托、CO₂采样过滤器。

• 浸泡消毒：分别使用0.5%过氧化氢至少10分钟，再用无菌水冲洗和晾干。

• 涂覆与局部擦拭：可在门框、铰链和密封槽加入少量润滑用医疗级硅脂。

• 箱体全面擦拭：重点清洁内壁四面、顶部风道和底部底座。

• 预运行通风：清洁后空箱运行30分钟，以乙醇蒸气辅助杀菌并吹除残留液体。

六、彻底灭菌–高温 Dry Heat / Steri-Run 循环

依据 Forma Stericum / Steri‑Run 高温程序：

1. 设备配置

• 确认可执行 Dry Heat 循环，并确认 Companion 控制菜单是否具备“Sterilization Cycle”按键 。

• 设置灭菌温度通常为140 °C（或180 °C，视设备承受能力），阶段包括加热、维持与冷却，总时长约12–14小时 。

2. 操作步骤

• 清空培养箱及相关组件（湿盘除外）。

• 启动灭菌程序，系统自动计算升温（2–4 h）、高温维持（2 h）、缓降温（6–8 h）阶段。

• 循环结束后，自然冷却至<50 °C，再打开门。

3. 灭菌验证

• 借助热敏验证纸或微生物孢子计数法检测灭菌效果。

• 填写灭菌记录，包括日期、操作人、温度曲线、留样结果等内容加入质量档案。

七、验证与合规建议

• 颗粒/微生物监测（空气与箱壁）：日常与清洁后常规验证。

• CO₂ 与温度校准：每次深度清洁后必须重新校准，稳定48小时后再次验证 。

• SOP 与培训记录：配备书面操作标准，培训签到、记录更新归档。

• 比对老旧底稿与现行版本：确保SOP同时包含GMP/GLP和实验室质量要求。

八、总结与建议

• 日常维护：保持基本无菌环境，预防常见细菌成膜和交叉污染。

• 月度深度清洁：去除沉积污垢与潜在病原体残留。

• 高温灭菌：全面消除生物负载，提供最高级别灭菌保障。

• 质量把控：结合验证程序与可靠记录确保SOP一致实施。