赛默飞荧光定量PCR仪Q7使用流程
一、实验准备
在启动任何 PCR 反应之前，需要完成充分的准备工作，以确保实验的准确性和安全性。
仪器状态检查
确认 Q7 主机电源正常连接，显示面板无报警提示。
检查温控模块表面是否干净平整，无试剂残留或物理损伤。
检查光学检测窗是否清洁透明，无灰尘或指纹污渍。
环境条件确认
实验室温度保持在 18–28℃，相对湿度低于 70%。
确保实验台面干净、干燥且远离强烈振动源。
试剂与耗材准备
按照实验方案准备 PCR 缓冲液、引物、探针、荧光染料及模板 DNA/RNA。
使用经灭菌处理的无酶耗材（如 PCR 管、反应板、移液枪头）。
所有试剂在使用前充分解冻并混匀，避免反复冻融。
个人防护
穿戴实验服、一次性手套和护目镜。
在无 RNA 酶、无 DNA 酶的环境中操作，防止样品降解或污染。
二、反应体系配置
反应体系的准确配置是确保扩增成功的基础。
反应体积与浓度
常规反应总体积为 10–50 μL，具体根据试剂说明与检测需求确定。
引物浓度一般为 0.1–0.5 μM，探针浓度为 0.05–0.25 μM。
反应液配置步骤
按试剂盒或实验方案要求将各组分加入无酶水中，最后加入模板核酸。
避免直接在反应管中加入高浓度模板，可先在单独管中混匀反应液。
混匀与离心
配置完成后轻轻混匀，可使用涡旋仪低速震荡。
在微量离心机中短暂离心，确保液体集中在管底，避免气泡影响光学检测。
三、样品装载
Q7 PCR 仪支持多种样品装载形式，包括 96 孔板和单管模式。
加样原则
在冰上操作，减少核酸降解风险。
避免产生气泡，必要时使用无气泡移液技巧。
封板与密封
使用光学透明封板膜，确保密封严实，防止蒸发与污染。
检查密封膜表面是否平整无皱褶，避免干扰光学信号。
放置样品
将反应板放置于样品槽内，位置准确对齐，避免倾斜。
样品放置完成后轻轻关闭压盖装置，避免用力过度造成损坏。
四、程序设定
Q7 的温控与检测程序通过配套软件进行设定，用户可根据实验方案自定义循环条件。
建立新实验文件
输入实验名称、日期、操作者等信息，便于后续数据管理。
选择检测模式（SYBR Green 或 TaqMan 探针法）。
温度循环设置
设定预变性（如 95℃，30 秒）、变性（95℃，5–10 秒）、退火/延伸（58–62℃，20–40 秒）等步骤。
循环次数通常设定为 35–45 次，根据检测灵敏度要求调整。
荧光采集设置
指定荧光采集通道及采集时间点（通常在延伸阶段末端）。
多重检测时为每种荧光标记选择合适的通道。
熔解曲线分析（适用于 SYBR Green）
设定升温速率和范围（如 65–95℃，每步 0.3℃），用于检测产物特异性。
五、运行与监控
启动程序后，Q7 会自动执行温控和光学采集过程。
软件界面可实时显示扩增曲线的变化趋势。
观察基线与指数期的信号变化，确保无异常波动。
异常处理
如果发现某通道信号明显异常，应立即暂停运行并检查样品或光学模块。
避免在运行过程中频繁开启仪器盖板，以免影响温控稳定性。
六、结果分析
实验完成后，软件会自动生成数据文件，用户可进行多种分析。
Ct 值分析
确定每个样品的循环阈值（Ct），作为定量分析的基础。
对标准品绘制标准曲线，计算扩增效率。
熔解曲线分析
单一峰值代表产物特异性好，多峰值提示可能存在非特异扩增。
多重检测数据处理
分别分析各通道数据，确保不同荧光信号无交叉干扰。
七、数据管理与导出
保存实验文件
建议按日期、实验类型和操作者命名文件，便于检索。
备份至独立硬盘或实验室服务器。
数据导出
支持导出 Ct 值表格、扩增曲线图、熔解曲线图等多种格式。
可选择导出为 Excel、PDF 或图像文件，用于后续分析或报告。
八、实验收尾与清洁
取出样品
戴手套取出反应板或管，按照生物安全规程处理。
废弃物放入专用核酸废弃物容器中。
清洁样品槽与光学模块
使用无尘布蘸取去离子水擦拭样品槽表面。
检查光学检测窗，必要时使用光学清洁纸轻拭。
关闭仪器
退出软件，安全关机。
覆盖防尘罩，保持设备清洁。
九、使用流程优化建议
缩短准备时间：提前配置好反应液的母液，减少每次加样的步骤。
提升检测一致性：固定加样顺序和时间，减少操作误差。
多重检测优化：选择光谱分离度高的荧光染料，避免信号干扰。
减少污染风险：建立独立的反应体系配置区和样品检测区。
十、结语
赛默飞荧光定量PCR仪 Q7 具备高精度温控、灵敏的多通道光学检测以及强大的数据分析能力，适用于多种分子检测任务。通过遵循上述使用流程，操作者不仅可以确保实验的准确性和稳定性，还能在长期使用中维持仪器的最佳性能。严格执行标准化流程是获得可靠、可重复科研数据的前提，也是保障实验室检测质量的重要环节。
