宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R使用方法
一、仪器概述
宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R是一款全自动化、多功能的实时荧光定量PCR分析系统。该仪器主要用于核酸检测、病原体分析、基因分型、转录水平研究以及临床诊断实验等场景。相比传统PCR，荧光定量PCR可以在扩增过程中实时监测反应体系内的荧光信号，通过荧光强度的变化反推出核酸的拷贝数，实现定性与定量的精准分析。
SLAN-96R型号在硬件结构、软件算法、光学系统和温控系统上都有优化，具备灵敏度高、重复性好、通量大等优势，广泛应用于医学检验、生物科研、食品安全检测及环境监测等领域。
二、使用前准备
1. 仪器安置
将仪器放置在稳定、防震的平台上，避免靠近水源、强磁场和阳光直射位置。
保持环境温度在18℃至30℃之间，相对湿度40%–70%。
预留足够的散热空间，确保风道通畅。
2. 电源与连接
使用符合仪器额定电压和功率的独立电源插座，避免与其他大功率设备共用。
打开电源前检查电源线是否连接牢固，避免接触不良。
与计算机相连时需确认USB或网络接口接触良好。
3. 软件安装
在配套电脑上安装SLAN-96R专用分析软件。
确认驱动程序和数据库正常运行。
软件首次启动时需进行系统初始化设置。
4. 耗材与试剂
使用推荐型号的96孔反应板、八联管或单管。
配套光学透明封板膜需平整贴合，避免气泡影响荧光信号。
反应体系包括引物、探针、核苷酸混合物、反应缓冲液及Taq酶。
实验前将样本与试剂在冰上准备，避免降解。
三、实验操作流程
1. 样品准备
样品可来自血液、组织、细胞或环境材料，经核酸提取纯化后作为模板。
需要测定浓度与纯度（常用A260/A280比值），保证模板质量适合PCR反应。
根据实验目的调整稀释倍数。
2. 反应体系配制
在无RNAse、DNAse污染的洁净台中操作。
按说明书推荐比例配置主混合液：包括缓冲液、dNTP混合物、引物对、探针、聚合酶等。
每管加入适量模板，总体积一般在20–50 μL范围。
设置阴性对照（无模板）与阳性对照（标准核酸），用于判定实验有效性。
3. 加样与封板
将反应体系加至96孔板中，每孔加样一致。
使用专用压膜机或手动刮板将光学膜贴紧，避免蒸发和交叉污染。
封板后轻轻离心，使液体沉于孔底。
4. 程序设定
在软件界面选择“新建实验”。
输入实验名称、日期、实验人员等基本信息。
设定反应程序：包括初始变性（一般95℃，2–3分钟）、循环变性（95℃，10–15秒）、退火与延伸（55–65℃，30–60秒），循环数通常设为40–45。
选择荧光通道（如FAM、HEX、ROX、Cy5），并分配至对应孔位。
保存程序并加载到主机。
5. 启动实验
将反应板放入仪器样品仓中，确保方向正确。
关闭仓盖，点击软件界面“开始运行”。
实验过程中可实时观察扩增曲线与荧光信号。
四、数据分析方法
1. 扩增曲线
软件自动绘制荧光信号随循环数的变化曲线。
正常扩增应呈现“S”型曲线：基线期、指数期、平台期。
若曲线无上升趋势需检查模板、引物和酶活性。
2. Ct值判定
Ct值为扩增曲线达到设定阈值时的循环数。
Ct值越小，说明模板浓度越高。
一般定量分析采用ΔCt或ΔΔCt法计算。
3. 标准曲线
通过已知浓度的系列稀释样品建立标准曲线。
软件自动回归计算斜率与相关系数R²。
根据曲线方程可推算未知样品的浓度。
4. 融解曲线
对SYBR Green等非特异性染料实验，可进行融解曲线分析。
单一峰形代表特异性扩增，多峰提示可能存在非特异产物或引物二聚体。
5. 报告输出
系统可生成扩增曲线图、Ct值表格、标准曲线图等结果。
用户可导出Excel或PDF格式文件，用于归档和后续分析。
五、常见问题与解决
无扩增信号：
检查是否加入模板、引物是否设计合理、酶是否失活。
确认反应体系中Mg²⁺浓度适当。
曲线拖尾或平台异常：
可能因荧光探针降解或反应体系污染。
调整反应体积或更换耗材。
Ct值不稳定：
样品浓度不均一或加样操作不规范。
仪器未校准温控或光学模块。
重复性差：
需确保反应体系充分混匀，样本分装均匀。
避免加样过程中形成气泡。
六、维护与保养
1. 日常维护
每次实验结束后，用无水乙醇或专用清洁布擦拭外壳。
样品仓保持清洁干燥，若有溅液需及时处理。
检查光学窗口是否清洁，避免灰尘影响检测。
2. 软件维护
定期更新软件版本，保证算法与数据库为最新。
建立实验文件夹分类存储，便于数据追溯。
3. 校准与检测
按照建议周期进行温控与光学系统校准。
使用标准品进行性能验证，确保检测灵敏度与准确性。
七、安全注意事项
操作PCR体系需在生物安全柜或洁净环境中进行，防止气溶胶污染。
样本涉及临床病原体时，应遵循相关生物安全规范。
实验耗材须高压灭菌或专用消毒后方可丢弃。
操作人员需佩戴手套、口罩和实验服，避免直接接触有害试剂。
八、应用实例
1. 病原体检测
通过特异性引物和探针，可快速检测病毒或细菌核酸，如呼吸道病毒、流感病毒、结核分枝杆菌等。
2. 遗传学研究
在基因表达分析中，通过比较目标基因与内参基因的相对表达水平，可研究不同条件下基因的调控机制。
3. 食品与环境监测
用于检测食品中的转基因成分、病原菌残留，以及水源和空气中的核酸污染物。
4. 临床诊断
在个体化医疗中，荧光定量PCR可检测肿瘤相关基因突变、药物代谢基因多态性，为治疗方案提供参考。
九、总结
宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R是一款高通量、灵敏度高且操作简便的实时定量PCR平台。其核心优势在于：
通过规范的实验步骤、科学的数据解读以及定期的维护保养，使用者能够充分发挥SLAN-96R的性能，为科研与诊断提供可靠的数据支持。
