宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R实验流程图详解
一、引言
荧光定量PCR（qPCR）作为现代分子生物学的重要工具，已经广泛应用于医学检验、临床诊断、食品安全、环境监测以及科学研究等领域。宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R是一款全自动化的实时荧光定量分析平台，能够在扩增过程中实时监控核酸扩增曲线，快速获得高灵敏度、高特异性的检测结果。
在实验应用中，流程图不仅仅是操作顺序的简单排列，更是一种将复杂实验体系化、结构化的方式。通过对SLAN-96R实验流程的逐步解读，可以帮助使用者清晰掌握各环节的逻辑关系，避免实验偏差。
二、整体流程图结构
宏石SLAN-96R实验流程可分为 五个主环节：
实验准备阶段
样品与反应体系配置
仪器设定与运行
数据采集与分析
实验结束与维护
这五个环节层层递进，形成一个闭合的操作循环。实验流程图可以形象地表示为“输入 → 反应 → 监测 → 分析 → 输出”的结构。
三、实验准备阶段
1. 环境条件
实验室应保持恒温、干燥，避免阳光直射。
台面需洁净，防止气溶胶污染。
分区操作：核酸提取区、体系配置区、扩增检测区分开。
2. 仪器检查
开机前检查电源和通讯接口。
确认光学模块和温控模块状态正常。
样品仓保持干燥，无残留液滴。
3. 软件准备
打开SLAN-96R配套软件。
设置实验目录，创建项目文件夹。
检查数据库与分析模块是否更新到最新版本。
四、样品与反应体系配置
1. 样品处理
使用专用试剂盒提取RNA或DNA。
检测核酸浓度和纯度，确保A260/A280比值在1.8–2.0之间。
将样品在冰上保存，避免降解。
2. 反应体系设计
一个标准反应体系包括：
模板：待检测核酸。
引物：特异性识别靶序列。
探针或染料：实时监测荧光信号。
缓冲液和Mg²⁺：维持最佳反应环境。
DNA聚合酶：催化核酸链合成。
3. 加样操作
每个孔按体系体积（通常20–50 μL）加入试剂。
设置阴性对照（NTC）与阳性对照，保证实验可靠性。
使用无RNAse、DNAse耗材。
4. 封板与离心
使用光学透明膜密封反应板。
轻轻离心，使液体沉降到孔底，避免气泡干扰。
五、仪器设定与运行
1. 程序设定
在软件界面设置热循环条件：
初始变性：95℃ 2–3分钟。
循环步骤：
变性：95℃ 10–15秒。
退火/延伸：55–65℃ 30–60秒。
循环次数：40–45次。
2. 荧光通道设置
SLAN-96R支持多种荧光通道，如：
FAM
HEX/VIC
ROX
Cy5
可根据实验设计选择对应通道并分配至相应孔位。
3. 启动实验
放入样品板，方向对齐。
关闭仓盖，确认密封良好。
点击“开始运行”，系统进入全自动监测状态。
六、数据采集与分析
1. 扩增曲线
软件实时绘制荧光信号随循环数的变化曲线。
正常扩增：呈S型曲线。
无扩增：需检查模板、引物或体系设置。
2. Ct值判定
Ct（Cycle threshold）为荧光信号超过阈值的循环数。
Ct值小表示模板浓度高。
定量分析采用ΔCt或ΔΔCt方法。
3. 标准曲线
使用稀释系列建立标准曲线。
系统计算斜率和R²值，评估扩增效率。
4. 融解曲线
适用于SYBR Green实验。
单一峰：特异扩增。
多峰：提示非特异性产物或引物二聚体。
5. 报告生成
软件自动生成实验结果表格与曲线图。
可导出Excel、PDF等多种格式。
七、实验结束与维护
1. 仪器清理
实验结束后关闭电源。
擦拭样品仓，保持无液体残留。
定期清洁光学通道。
2. 软件数据管理
分类保存实验数据。
定期备份，避免数据丢失。
3. 校准与维护
定期进行光学和温控系统校准。
使用标准品检测仪器灵敏度与准确性。
八、实验流程图逻辑解读
从文字角度描述实验流程图，可以抽象为以下层次：
第一层：输入
样品 → 核酸提取 → 浓度检测 → 合格模板。
第二层：体系搭建
试剂准备 → 反应体系配置 → 对照设置 → 封板离心。
第三层：反应运行
加载程序 → 温控循环 → 荧光采集 → 实时监控。
第四层：输出分析
扩增曲线 → Ct值 → 标准曲线 → 融解曲线 → 数据报告。
第五层：反馈维护
问题排查 → 数据保存 → 仪器保养 → 下次实验优化。
这种结构化的逻辑可以对应绘制为矩形框、箭头连接的实验流程图，操作人员在图示引导下能迅速理解每一环节的意义。
九、常见问题与流程优化
扩增失败：需追溯到样品准备或反应体系。
信号偏弱：检查荧光探针、酶活性或加样量。
曲线异常：可能是膜封闭不严或产生气泡。
Ct值漂移：注意操作一致性和温控校准。
流程优化思路：
在流程图中加入风险节点标记，提醒操作要点。
使用颜色区分“准备—反应—分析—维护”四个模块，提高直观性。
在每个环节附带操作规范和注意事项。
十、总结
宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R实验流程图不仅是一份操作指南，更是一种实验思维模式的直观表达。通过将复杂的PCR实验转化为逐层展开的流程，研究人员能够快速上手，降低出错率，提高实验效率。
整体而言，流程图可以帮助实验人员实现：
快速理解：一目了然的操作顺序。
精确执行：减少实验偏差和误差累积。
高效管理：标准化实验流程，便于培训与推广。
可追溯性：从样品输入到结果输出，全程可控。
随着分子诊断与精准医疗的发展，SLAN-96R及其实验流程标准化的优势将更加凸显，为科研与临床检测提供坚实的数据保障。
