宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R详细操作步骤
一、实验前准备
在正式操作SLAN-96R之前，必须做好环境、仪器和试剂的准备工作，以确保实验的准确性和稳定性。
1. 环境准备
实验室温度保持在18–30℃之间，湿度控制在30%–80%。
实验区域应避免直射光线和强烈气流。
桌面需平整稳固，避免震动和灰尘。
设置专门的清洁区和加样区，减少交叉污染。
2. 电源与硬件检查
电源电压要求220V±10%，频率50Hz。
建议使用稳压电源或UPS，防止断电影响实验。
检查电源线和通信线连接是否牢固。
开机前确认仪器外观无损伤。
3. 试剂与耗材准备
4. 样品配置
按照实验方案配置反应体系，体积一般为20µL或25µL。
设置阳性对照和阴性对照，确保实验结果可信。
配置完成后轻轻混匀，并用离心机短暂离心去除气泡。
二、仪器开机与软件启动
打开SLAN-96R电源开关，等待系统自检完成。
在计算机上启动配套软件。
检查软件是否能正常识别仪器，若无连接则排查USB或网线接口。
进入“新建实验”界面，为实验输入文件名和保存路径。
三、实验设置步骤
1. 循环程序设定
初始变性：一般95℃，2–5分钟。
循环阶段：
变性：95℃，10–15秒。
退火：55–65℃，20–30秒。
延伸：72℃，20–30秒。
循环次数：35–45次，具体依赖于实验要求。
荧光采集点通常设置在退火或延伸阶段。
2. 荧光通道设置
选择实验使用的荧光染料（如FAM、HEX、ROX、CY5等）。
为不同样品分配检测通道，避免重复或遗漏。
若为多重检测，需明确各通道对应的基因靶标。
3. 样品板布局
在软件界面中建立与96孔板对应的样品布局。
输入样品编号、实验分组、对照类型。
标记空孔，避免软件误判。
四、加样与反应板装载
在无污染环境中使用移液器将反应体系分装到96孔板中。
加样过程中避免产生气泡。
使用光学封板膜密封反应板，确保边缘贴合紧密。
将反应板放入离心机，短暂离心，确保液体沉底且无气泡。
将反应板放入SLAN-96R样品仓内，注意方向标记与仪器一致。
关闭反应仓盖，确认已锁紧。
五、实验运行与实时监控
在软件中点击“开始运行”。
仪器进入自动加热循环，系统实时采集荧光信号。
软件界面显示扩增曲线，可随时观察反应进展。
若出现异常信号，应立即暂停并检查对应样品。
六、数据分析步骤
实验结束后，SLAN-96R软件会自动保存检测数据，用户需根据实验目的进行分析。
1. 扩增曲线分析
检查阴性对照孔，应无扩增信号。
阳性对照应在合理Ct值范围内。
样品曲线呈指数增长，说明扩增正常。
2. 标准曲线与定量分析
使用已知浓度的标准品绘制标准曲线。
检查曲线线性相关系数R²，应大于0.98。
PCR效率计算：90%–110%为理想范围。
根据Ct值和标准曲线进行绝对定量或相对定量。
3. 熔解曲线分析
选择SYBR Green体系时必须检查熔解曲线。
单一峰值表明扩增产物特异性良好。
多峰或拖尾表明存在引物二聚体或非特异扩增。
4. 数据导出
软件支持导出Excel、PDF、图片等格式。
实验结果可保存至实验室数据库或打印存档。
七、常见问题与解决办法
1. Ct值偏高
模板量不足或降解。
引物浓度过低。
热循环条件需优化。
2. 无扩增曲线
检查反应体系配置是否正确。
样品是否加错或漏加。
仪器荧光通道是否设定正确。
3. 熔解曲线异常
调整退火温度。
重新优化引物序列。
确认反应体系中无污染。
4. 信号波动大
反应板封膜不严，导致蒸发。
加样体积不一致。
仪器光学系统需清洁。
八、维护与保养
1. 日常维护
实验结束后及时清理样品仓。
避免液体溅入光学窗口。
定期清理仪器外部灰尘。
2. 光学系统维护
使用无水乙醇和无尘布轻拭光学窗口。
不可使用腐蚀性溶剂清洁。
3. 温控系统校准
按厂家说明定期校准温控精度。
出现温度异常时应联系技术支持。
4. 长期停机处理
切断电源，覆盖防尘布。
存放于干燥通风环境中。
九、应用拓展
SLAN-96R的应用范围不仅限于基础科研，还可扩展到多种应用场景：
临床诊断：病毒核酸检测、细菌定量、耐药基因分析。
遗传学研究：基因分型、突变检测、SNP分析。
药物研发：药效学研究、药物代谢相关基因检测。
食品安全：转基因成分检测、致病菌筛查。
十、总结
宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R以其高灵敏度的光学检测系统和精确的温控性能，为分子诊断和科学研究提供了可靠工具。通过标准化的操作步骤、合理的实验设计与科学的数据分析，可以获得高重复性与高准确性的结果。掌握本教程中的详细流程，能够帮助使用者熟练操作该仪器，避免常见问题，并充分发挥SLAN-96R在科研与临床中的价值。
