宏石荧光定量PCR仪 SLAN-96R 使用规范
一、总则
宏石荧光定量PCR仪 SLAN-96R 是一款高灵敏度、多通道的实时荧光定量 PCR 仪器，广泛应用于科研检测、临床诊断、食品安全与环境监测。为了保证实验结果的准确性和实验人员的安全，必须遵循统一的操作规范。本文档旨在提供系统的使用指南，从实验准备到实验结束的全过程进行详细说明，确保每一位操作人员能够熟练、安全地开展实验工作。
二、实验室基本要求
环境条件
温度：18–30℃，避免温度波动过大。
相对湿度：40–70%。
防尘、防潮，保持空气洁净。
区域划分
试剂准备区：配制反应体系。
样品处理区：进行核酸提取。
扩增检测区：放置 PCR 仪器并进行扩增反应。
各区域人员、耗材不得交叉，以降低污染风险。
人员要求
操作人员需经过专业培训，掌握 PCR 原理与 SLAN-96R 的使用流程。
实验过程中须穿戴实验服、手套、口罩，避免直接接触样本。
三、实验前准备
1. 仪器检查
打开电源，确认自检程序正常。
检查热循环模块表面是否清洁无损。
光学系统窗口应无灰尘与指纹。
热盖温度预设 105℃ 左右，防止样品蒸发。
2. 耗材准备
PCR 管、八联管或 96 孔板须为光学透明材质。
使用带滤芯移液枪头，避免气溶胶污染。
使用专用封板膜，确保密封性。
3. 试剂与样品准备
所用试剂必须在有效期内，严格按说明保存。
样本核酸提取需在专门区域完成，并避免反复冻融。
配制反应体系时，优先采用“主混液+模板”方式，最后加模板，减少污染。
四、操作流程规范
1. 配制反应体系
根据实验方案设计，引物、探针、预混液比例严格准确。
设置阳性对照、阴性对照和标准品，确保实验可溯源。
体系混合均匀后，短暂离心，确保液滴集中管底。
2. 加样操作
在洁净台中进行，避免外部环境污染。
每次移液后更换枪头，防止交叉污染。
加样体积须符合实验要求，避免产生气泡。
3. 上机运行
打开热循环仪盖子，将 PCR 板正确放置。
确认板与热循环模块紧密贴合，避免温控不均。
通过软件设定程序，包括预变性、循环数、荧光采集点。
若需熔解曲线分析，应设置合适的升温范围。
4. 实验运行与监控
启动实验后，系统将自动完成扩增与信号采集。
操作人员可实时监控扩增曲线，发现异常及时终止实验。
运行过程中避免触碰或移动设备。
五、数据分析规范
Ct 值判定
阴性对照不得出现扩增曲线。
阳性对照 Ct 值应在合理范围内。
平行样本 Ct 值差异应小于 1。
标准曲线与效率
R² 值应大于 0.99，扩增效率在 90–110% 为合格。
标准品浓度梯度需准确配置。
熔解曲线分析
单一特异性产物应表现为单一峰。
若出现多个峰，需检查引物特异性或退火温度。
六、实验注意事项
防止污染
严格遵循“单向操作”，避免样品与试剂回流。
阴性对照必须全程设立，用于监控污染。
温控细节
热循环模块需保证表面平整洁净。
热盖温度设置需高于反应体系约 10℃。
光学检测
不可用手直接触碰光学检测区域。
定期清洁光学通道窗口，避免灰尘干扰。
软件操作
程序设定须与实验设计一致，不可随意更改。
数据文件命名规范化，便于存档与追溯。
七、安全要求
实验过程中接触的样品与耗材均视为潜在污染物，实验结束后应高压灭菌。
荧光染料避免直接接触皮肤和眼睛。
设备周边保持整洁，不得堆放杂物。
突发停电时，保持设备盖子关闭，待恢复供电后再评估实验是否需重做。
八、常见问题与处理
无扩增曲线
检查模板是否降解。
确认体系配置是否正确。
检查光学通道是否匹配。
Ct 值偏高
模板量不足或降解。
热循环条件不合适。
反应体系含有抑制物。
阴性对照扩增
存在气溶胶污染，应更换试剂并清洁环境。
重新校准操作区域。
熔解曲线异常
非特异性扩增，应优化退火温度或引物。
出现引物二聚体，可调整引物浓度。
九、维护与保养规范
日常维护
实验结束后，用无水乙醇擦拭热循环模块。
保持光学窗口清洁。
定期清除机身灰尘，确保通风口畅通。
定期保养
每 3–6 个月进行一次温度校准。
每年进行一次光学模块校准。
定期检查软件更新，保持系统兼容性。
存放与停机
长期停用时，关闭电源并覆盖防尘罩。
存放环境应干燥、无腐蚀性气体。
十、总结
宏石荧光定量PCR仪 SLAN-96R 的使用规范涵盖了实验室环境要求、操作流程、数据分析、安全规范以及维护保养。遵循统一规范不仅能保证实验结果的准确性和重复性，也能延长设备使用寿命，降低实验风险。
在实际工作中，实验人员应养成良好的实验习惯，从试剂准备到数据解读全程严格控制细节。同时，实验室管理者应定期组织培训，确保操作团队对规范内容熟悉并执行到位。只有在制度化与标准化的保障下，SLAN-96R 才能发挥出最大的科研与临床应用价值。
