宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R操作流程
一、前言
宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R是一款基于实时荧光定量检测的分子生物学设备，广泛应用于临床检验、科研实验、公共卫生和食品安全等领域。为确保实验数据的准确性和结果的可重复性，规范的操作流程至关重要。本文将从实验准备、反应体系构建、上机操作、数据采集与分析、实验结束与维护五个方面详细介绍SLAN-96R的操作流程。
二、实验前准备
1. 环境准备
实验室条件：保持清洁、干燥，避免灰尘和杂质干扰。
温湿度控制：室温20–25℃，湿度40–60%为宜。
防污染措施：设立样品处理区和扩增检测区，分区操作。
2. 仪器检查
确认电源连接正常，电压稳定。
检查光学系统、加热模块是否清洁。
开机运行自检程序，确保仪器处于良好状态。
3. 试剂准备
核酸提取试剂、PCR反应体系试剂等提前解冻并混匀。
配制反应液前需在冰上操作，避免核酸降解。
检查试剂有效期与批号，避免使用过期产品。
4. 耗材准备
使用与仪器兼容的96孔反应板或八联管。
确保封板膜、移液枪头等耗材无污染。
三、反应体系构建
1. 样品处理
按照实验要求提取核酸，获得纯化后的DNA或RNA。
RNA样品需反转录成cDNA后再用于PCR扩增。
2. 反应体系配置
根据不同的检测目的配置PCR体系（常见体系为20 μL）：
上样模板：1–2 μL
PCR Mix：10 μL
引物探针：各0.5–1 μL
无核酸水补足至反应总体积
3. 内外对照设置
阳性对照：确保体系和仪器正常工作。
阴性对照：检测是否存在污染。
内参基因：监测扩增体系稳定性。
4. 上样与封板
将反应液均匀加入反应孔。
使用透明封板膜密封，避免蒸发。
轻轻离心，确保液滴集中于孔底。
四、仪器操作流程
1. 开机与登录
打开电源，等待系统自检完成。
通过触控屏或电脑端软件登录实验账户。
2. 建立实验程序
新建实验项目并输入实验名称。
设置扩增程序：包括变性、退火、延伸的温度与时间。
若需温度梯度优化，可选择梯度模式。
3. 样品布局
在软件中建立样品布局表，输入孔位对应的样品编号。
明确标注阳性对照、阴性对照及未知样品。
4. 荧光通道设置
根据探针或染料类型选择荧光通道（如FAM、HEX、ROX、CY5）。
若为多重PCR，需分配不同通道检测不同靶标。
5. 启动运行
将反应板放入样品槽，确认位置正确。
关闭仓盖，启动扩增程序。
仪器自动执行循环扩增并实时采集荧光信号。
五、实验运行监控
1. 实时监控界面
显示每个通道的扩增曲线。
可实时查看Ct值变化。
若某孔异常，可及时终止或标记。
2. 温控与运行状态
软件显示实时温度变化，确保温控系统正常。
若出现温控异常，系统会报警提示。
3. 运行时间
标准40循环程序一般需1.5–2小时。
实验结束后自动弹出提示。
六、数据采集与分析
1. 扩增曲线分析
判断扩增曲线是否符合S型特征。
阳性样本曲线上升明显，阴性对照无扩增。
2. Ct值计算
系统自动给出Ct值，可人工调整阈值线。
多孔重复实验应取平均值。
3. 标准曲线绘制
使用系列稀释标准品建立曲线。
检查扩增效率（一般在90–110%之间）。
4. 熔解曲线分析
检测SYBR Green实验是否存在非特异性产物。
峰值单一则扩增特异性好，若出现双峰需排查引物问题。
5. 结果解释
根据Ct值与标准曲线计算目标核酸拷贝数。
阴性对照若出现信号，需怀疑污染并重新实验。
七、实验结束与仪器维护
1. 结果保存
将实验数据保存至本地或服务器。
可导出PDF或Excel文件作为报告。
2. 实验耗材处理
使用过的反应板置于生物危害废弃物容器内。
清理台面，避免残留污染。
3. 仪器维护
擦拭光学检测窗，保持洁净。
定期检查Peltier模块运行情况。
建立维护记录，保证长期稳定使用。
4. 关机与存档
退出软件系统，关闭电源。
将实验记录、数据文件整理归档。
八、关键注意环节
样品处理区与扩增检测区必须分开，避免交叉污染。
移液操作需规范，每次更换枪头，防止交叉混入。
对照设置完整，结果解读必须结合阳性和阴性对照。
扩增程序必须准确，否则会影响数据可靠性。
异常情况及时记录，如曲线异常、对照失效等。
九、优化操作建议
使用梯度温度实验优化引物退火条件。
对低浓度样品可适当增加循环数。
定期使用标准品校准扩增效率，确保长期稳定。
若进行多重PCR，应避免荧光通道串扰，合理设计引物探针。
十、结论
宏石荧光定量PCR仪SLAN-96R的操作流程涵盖了从实验前准备到结果分析的完整环节。规范化的操作能够保证数据真实可靠，同时提升实验效率与检测质量。通过严格遵循操作步骤，结合完善的实验记录和质量控制体系，SLAN-96R能够在科研、临床、公共卫生和教学中发挥出最佳性能。未来，随着自动化与智能化的发展，SLAN-96R的操作流程将进一步简化，但其核心环节依旧是确保结果准确的关键。
