宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P实验流程
一、实验概述
宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P是一款中等通量的实时荧光定量PCR检测平台，可同时处理48个样本。它通过精确的温控系统和灵敏的多通道荧光检测模块，实现核酸扩增过程的实时监测，从而完成对目标核酸的定性和定量分析。
在实际应用中，SLAN-48P常用于病原体检测、基因表达分析、转基因成分检测、肿瘤标志物研究以及环境安全监测。为了保证实验结果的准确性和可重复性，必须严格遵循规范化的实验流程。
二、实验流程框架
SLAN-48P实验流程可划分为以下七个主要环节：
实验前准备
样品提取与核酸纯化
反应体系配置
加样与封板
仪器设定与运行
数据采集与分析
实验结束与维护
这七个环节环环相扣，构成了一个完整的实验闭环。
三、实验前准备
1. 实验环境
实验室应按照分区要求建立核酸提取区、体系配置区和扩增检测区。
温度控制在18–30℃，湿度40–70%。
操作前用紫外灯照射或酒精擦拭台面，防止污染。
2. 仪器检查
确认电源正常，仪器处于待机状态。
检查样品仓和光学窗口，保持清洁干燥。
确认计算机与仪器连接良好。
3. 软件准备
启动SLAN-48P配套软件，检查是否更新至最新版本。
建立实验文件夹并填写实验名称、日期、操作者等基本信息。
四、样品提取与核酸纯化
1. 样品类型
可来自血液、组织、细胞、拭子、食品或环境样本。
2. 核酸提取
使用专用试剂盒提取DNA或RNA。
确保核酸浓度与纯度达标，常用检测方法为分光光度计或荧光定量法。
3. 质量控制
A260/A280比值在1.8–2.0之间为合格。
低质量样本可能导致扩增失败或Ct值偏高。
五、反应体系配置
1. 体系组成
PCR缓冲液
dNTP混合液
Mg²⁺溶液
特异性引物与探针
热稳定DNA聚合酶
模板核酸
2. 体积设计
每孔总反应体系体积一般为20–25 μL。
建议先制备主混合液，再逐孔加入模板。
3. 对照设置
阳性对照：验证体系是否正常。
阴性对照：监测可能的污染。
无模板对照：确保无假阳性结果。
内参对照：用于归一化分析，保证定量结果准确。
六、加样与封板
1. 加样要求
操作需在无RNAse、DNAse污染的环境下进行。
使用多道移液器可提高一致性。
加样时避免产生气泡。
2. 封板步骤
使用光学透明膜封口，保证密封严实。
使用离心机轻轻离心，使液体沉至孔底。
七、仪器设定与运行
1. 程序设定
初始变性：95℃，2–3分钟。
循环步骤：
变性：95℃，10秒
退火/延伸：55–65℃，30秒
共循环40–45次
2. 荧光通道设置
常见通道：FAM、HEX/VIC、ROX、Cy5。
根据试剂选择正确通道并分配至孔位。
3. 启动实验
将反应板放入样品仓，确认位置正确。
关闭仓盖，点击运行。
实验过程中可实时查看扩增曲线。
八、数据采集与分析
1. 扩增曲线
理想曲线应呈“S”型，包括基线期、指数期和平台期。
若曲线平直或异常，应检查样品或试剂。
2. Ct值判定
系统根据阈值自动计算Ct值。
Ct值越小，代表模板浓度越高。
3. 标准曲线
使用已知浓度系列标准品建立曲线。
斜率应接近 -3.3，扩增效率约100%。
R² 大于0.99说明线性良好。
4. 融解曲线
适用于SYBR Green体系。
单一峰值说明特异性好；多峰提示可能存在非特异性产物。
5. 报告生成
软件自动输出实验结果，包括Ct值表格、扩增曲线、标准曲线与融解曲线。
数据可导出为PDF、Excel或图片格式。
九、实验结束与维护
1. 仪器清洁
实验完成后关闭电源。
清洁样品仓，保持干燥无残留。
定期清洁光学模块，避免信号干扰。
2. 数据管理
分类保存实验数据，建立数据库。
定期备份至服务器或移动硬盘，避免丢失。
3. 定期校准
对温控与光学系统进行定期校准。
使用标准品进行性能检测，确保灵敏度和准确性。
十、常见问题与解决方案
无扩增信号
检查是否加入模板或模板质量是否合格。
确认引物与探针设计是否合理。
检查酶活性。
Ct值偏高
模板浓度低或降解。
阈值设置过高。
体系比例需优化。
曲线异常
封板不严或存在气泡。
光学通道受污染。
重复性差
加样不均匀。
温度均一性异常。
十一、总结
宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P实验流程涵盖了实验准备、样品处理、体系配置、加样、仪器设定、数据分析及维护等完整环节。通过标准化流程，实验人员能够保证实验结果的科学性和可重复性。
在准备阶段，应保证环境清洁与仪器状态正常。
在反应体系配置阶段，应严格按照配比操作，并设置必要的对照。
在运行阶段，应合理设定温度循环和荧光通道。
在数据分析阶段，应综合扩增曲线、Ct值、标准曲线与融解曲线进行判断。
在实验结束后，应重视仪器清洁、数据保存和系统维护。
通过对SLAN-48P实验流程的系统掌握，实验室可显著提升检测能力与科研水平，为临床诊断和科学研究提供可靠保障。
