宏石荧光定量PCR仪 SLAN-48P 操作规范
一、前言
宏石荧光定量PCR仪 SLAN-48P 是一款中通量实时荧光定量检测平台，广泛应用于临床检测、科研实验、食品与环境安全等领域。其特点在于通量适中（48 孔），适合中小规模实验室使用。本规范旨在为实验人员提供标准化操作流程，保证实验结果的准确性和可重复性，同时保障设备安全运行与使用寿命。
二、实验环境与人员要求
1. 环境要求
室温保持在 18–30℃，避免剧烈波动。
相对湿度控制在 40–70%。
实验室应分为三个区域：试剂准备区、样品处理区、扩增检测区，禁止交叉操作。
环境保持清洁，无灰尘和气溶胶污染。
2. 人员要求
操作人员需经过 PCR 实验与 SLAN-48P 使用培训。
实验全程佩戴手套、口罩、实验服，避免样品污染。
严格遵守“单向操作原则”，即样品由准备区向检测区流动，不可逆流。
三、实验前准备
1. 仪器检查
启动电源，确认自检程序无异常。
检查热循环模块表面是否干净平整。
确认光学检测窗口无灰尘、油迹或指纹。
热盖温度默认设为 105℃。
2. 耗材准备
使用专用的光学透明 PCR 管、八联管或 48 孔板。
采用带滤芯枪头，避免气溶胶污染。
封板膜应保证密封良好，防止蒸发。
3. 试剂与样品准备
核酸提取需在专门区域进行，避免交叉污染。
反应体系采用“主混液 + 模板”的配置方式。
设置阴性对照、阳性对照和标准品。
所有试剂应在使用前充分融解、混匀，并短暂离心。
四、反应体系配置规范
1. 基本组成
预混液（含缓冲液、酶、dNTPs）。
引物与探针。
模板核酸。
无核酸酶水。
2. 配制要求
按体系要求准确移液，不得随意调整比例。
每次移液后更换枪头，避免交叉污染。
配制完成后轻轻混匀并短暂离心，保证液滴集中于管底。
3. 对照设置
阴性对照（NTC）：检测污染。
阳性对照：验证体系有效性。
标准品：用于绘制标准曲线，实现定量分析。
五、样品上机操作
1. 放置样品
打开热盖，将 PCR 板或管放入样品槽。
确认方向正确，避免放置错误。
样品板与模块紧密接触，确保温度均一。
2. 软件操作
启动配套软件，新建实验任务。
输入实验名称、日期、样品编号。
选择实验类型：定性检测、绝对定量、相对定量或熔解曲线分析。
设置温度循环程序（预变性、变性、退火、延伸），以及循环次数（一般 40–45 次）。
设置荧光通道（FAM、HEX/VIC、ROX、Cy5 等）。
保存实验方案并检查无误。
3. 启动实验
点击运行，仪器自动完成热循环与荧光信号采集。
实验过程一般耗时 1.5–2 小时。
实验过程中不得随意开盖或移动设备。
六、数据分析规范
1. Ct 值判定
Ct 值（阈值循环数）应在合理范围。
阴性对照无扩增曲线，若有异常扩增说明存在污染。
阳性对照 Ct 值稳定，验证体系有效性。
2. 标准曲线
梯度稀释标准品绘制曲线，R² ≥ 0.99。
扩增效率在 90–110% 范围内为合格。
3. 熔解曲线
单一峰说明产物特异性好。
多峰提示非特异性扩增或引物二聚体。
4. 报告生成
软件自动生成实验报告，包括扩增曲线、熔解曲线和 Ct 值表。
可导出 PDF 或 Excel 格式，便于存档与分析。
七、实验注意事项
防止污染
严格区分试剂区与样品区。
阴性对照全程设置，实时监控污染情况。
使用专用移液器，定期更换滤芯枪头。
温控管理
热循环模块保持清洁，避免因残留物导致温控不均。
热盖温度应略高于反应体系退火温度，防止蒸发。
光学检测
光学窗口避免划痕和灰尘。
实验中不要开盖，否则可能导致光学检测异常。
软件操作
参数设定需严格按照实验设计。
文件命名规范，避免数据混乱。
八、安全规范
样品、耗材均视为潜在污染物，实验结束后统一处理。
含荧光染料的体系避免直接接触皮肤和眼睛。
废弃物必须经过高压灭菌后再处理。
仪器周围保持整洁，不得堆放无关物品。
九、常见问题与解决
无扩增曲线
检查模板是否降解。
确认反应体系完整。
检查通道选择是否正确。
Ct 值偏高
模板量不足。
退火温度过高。
移液误差导致体系不足。
阴性对照出现扩增
存在气溶胶污染，应更换试剂并重新实验。
检查实验区隔离是否到位。
熔解曲线多峰
优化退火温度。
检查引物设计与浓度。
十、维护与保养
1. 日常维护
实验结束后用无水乙醇清洁热循环模块。
光学窗口如有污染，用镜头纸轻拭。
保持设备外部整洁，定期除尘。
2. 定期保养
每 3–6 个月进行温度校准。
每年进行光学校准，确保通道灵敏度。
检查软件是否为最新版本，及时更新。
3. 存放要求
长期不用时关闭电源并覆盖防尘罩。
存放在干燥环境，避免阳光直射和腐蚀性气体。
十一、总结
宏石荧光定量PCR仪 SLAN-48P 操作规范涵盖了实验准备、反应体系配置、上机运行、数据分析、安全管理和维护保养的全流程。严格遵循这些规范，不仅能确保实验结果的准确性和可重复性，还能有效延长仪器的使用寿命，提升实验室整体工作效率。
在临床诊断、科研研究、食品安全与公共卫生领域，SLAN-48P 已成为可靠的分子检测工具。通过标准化的操作规范，实验室可以实现检测质量的持续稳定，为科学研究和健康保障提供坚实的支撑。
