一、操作使用常见问题
1. 开机后仪器无法正常启动
原因分析：
电源线未连接或插头接触不良。
电压不稳或电源模块保护触发。
主机开关未开启或保险丝损坏。
解决方法：
确认电源线与插座连接牢固。
检查供电电压是否在 100–240 V 范围。
更换保险丝或联系售后工程师检修。
2. 样品上机后无法检测到荧光信号
原因分析：
荧光染料或探针浓度不足。
检测通道选择错误。
管壁有气泡或反应液体未沉至管底。
解决方法：
核对试剂配方，确认加入正确。
在软件中重新勾选正确通道。
上机前轻轻离心或拍打管壁，消除气泡。
3. 实验过程中软件显示通信中断
原因分析：
USB 连接线松动或质量不佳。
电脑端口异常。
软件崩溃或驱动丢失。
解决方法：
更换 USB 线并重新连接。
尝试更换电脑接口。
重新安装驱动或更新软件。
二、试剂体系常见问题
1. 无扩增曲线
可能原因：
模板未加入或降解严重。
引物或酶失效。
程序设置有误。
解决方法：
检查体系配置是否完整。
使用新鲜引物和酶。
确认 PCR 程序是否包含预变性、退火与延伸步骤。
2. Ct 值偏大或波动明显
可能原因：
模板浓度过低或提取不纯。
移液不准确，导致体系误差。
热盖温度不足，反应液蒸发。
解决方法：
增加模板量或优化提取方法。
使用校准后的移液器。
检查热盖温度设定。
3. 扩增曲线拖尾或平台期不明显
可能原因：
存在反应抑制剂。
扩增效率不足。
模板浓度过高。
解决方法：
稀释样品，降低抑制剂浓度。
优化引物设计。
使用合适浓度的模板。
4. 熔解曲线出现多峰
可能原因：
引物特异性差，存在非特异扩增。
体系污染导致混合信号。
引物二聚体形成。
解决方法：
重新设计引物。
严格区分实验分区，避免污染。
降低引物浓度或优化退火温度。
三、结果分析常见问题
1. 阴性对照出现扩增信号
原因分析：
污染导致非特异性扩增。
试剂体系被外源 DNA 干扰。
解决方法：
更换试剂并清洁实验环境。
加强无核酸酶耗材的使用规范。
2. 扩增曲线斜率异常
原因分析：
扩增效率低于 90% 或高于 110%。
标准曲线配置浓度不合理。
解决方法：
调整引物和 Mg²⁺ 浓度。
重新制作标准品稀释梯度。
3. 多重检测中通道信号交叉
原因分析：
光学滤光片间串扰。
荧光基团选择不合理。
解决方法：
避免使用光谱重叠的荧光基团组合。
在软件中校正通道分配。
四、软件功能常见问题
1. 无法新建实验任务
原因分析：
软件版本过旧。
用户权限不足。
解决方法：
升级到最新版本软件。
使用管理员账户登录。
2. 数据无法导出
原因分析：
存储路径权限受限。
文件格式不兼容。
解决方法：
更换导出路径。
尝试使用 Excel 或 PDF 格式。
3. 实验数据丢失
原因分析：
软件运行异常。
未及时保存实验结果。
解决方法：
设置自动保存功能。
建立数据备份机制。
五、硬件维护常见问题
1. 模块温度不均一
原因分析：
长期使用导致温控模块老化。
反应孔有异物残留。
解决方法：
定期校准温控模块。
清洁模块表面，避免堵塞。
2. 光学信号偏低
原因分析：
光路组件灰尘遮挡。
荧光染料浓度过低。
解决方法：
使用无尘布清洁光学窗口。
确认试剂浓度合适。
3. 热盖无法关闭或温度异常
原因分析：
热盖机构磨损或卡滞。
控温传感器失灵。
解决方法：
检查热盖结构，必要时更换零件。
联系售后服务校准传感器。
六、实验安全与规范问题
1. 如何避免实验污染？
分区操作：样品前处理、体系配置、产物分析分区独立。
使用一次性耗材，避免重复利用。
设立阴性对照监控污染。
2. 使用过的 PCR 管如何处理？
应集中收集，121℃ 高压灭菌后丢弃。
严禁随意丢入生活垃圾桶。
3. 实验操作的个人防护
必须佩戴手套与实验服。
RNA 实验需使用防 RNase 手套。
必要时在生物安全柜中操作。
七、培训与应用常见问题
1. 初学者容易出现的错误
忘记加入关键组分（如引物或酶）。
上机前未消除气泡。
软件通道选择错误。
建议：建立实验清单，每次操作前逐项确认。
2. 教学中如何演示？
可使用模拟模板与对照组进行示范。
展示扩增曲线与熔解曲线的变化规律。
强调对照的重要性，让学生理解实验可靠性。
3. 培训中常被提问的问题
为什么 Ct 值不同样品差异大？
→ 与模板量、纯度及反应效率相关。为什么对照组也出现荧光？
→ 多数为污染或非特异扩增。如何判断数据是否可靠？
→ 需结合熔解曲线与重复实验结果。
八、综合总结
博日 FQD-16A 实时荧光定量 PCR 仪在实验应用中表现出可靠性和灵敏度，但在实际操作中常见的问题不可忽视。
操作层面，需注意上机步骤与参数设置。
试剂层面，需保证模板纯度与试剂新鲜度。
数据层面，应结合曲线形态与对照组综合判断。
维护层面，定期校准和清洁可延长仪器寿命。
通过总结常见问题并逐一解决，使用者能够更高效地掌握实验技巧，保证结果的准确性与重复性，使 FQD-16A 在科研、临床、农业及教学中发挥最大价值。
