博日荧光定量PCR仪FQD-16B操作手册
一、前言
荧光定量PCR（qPCR）技术是现代分子生物学、医学检验、食品安全和环境监测中不可或缺的核心技术。博日荧光定量PCR仪FQD-16B作为一款小通量的高性能平台，具有操作简便、数据准确、运行稳定的特点，非常适合科研实验室、教学实验室以及临床检测的多样化应用。
本操作手册旨在为实验人员提供系统性指导，帮助使用者掌握设备的操作方法和维护要点，确保实验数据的科学性和可靠性。
二、设备概述
1. 基本参数
通量：16孔反应模块，适用于小规模实验。
温控范围：4℃–100℃，升降温速率快。
光学检测系统：支持多通道检测，兼容多种常用荧光染料。
界面：触控式操作，配合智能分析软件，简化实验流程。
2. 核心功能
定量检测：支持绝对定量和相对定量。
熔解曲线分析：检测扩增产物特异性。
自检功能：开机时自动检测温控和光学系统状态。
数据分析：自动生成扩增曲线、Ct值表格及熔解曲线。
三、开机与初始化
1. 开机前准备
确保设备置于稳固台面，避免震动。
环境温度保持在18℃–28℃，湿度35%–70%。
接通电源，确认电压稳定并接地良好。
2. 开机流程
打开电源开关，等待系统启动并进入主界面。
设备自动执行自检，包括温控模块、光学检测模块、电源稳定性。
自检无异常后，系统进入待机状态，可开始实验设置。
四、实验设置
1. 建立新实验
在主界面选择“新建实验”。
输入实验名称、日期及操作者信息，便于后续数据追踪。
2. 程序设置
预变性阶段：95℃，2–3分钟。
循环阶段（通常30–40个循环）：
变性：95℃，10–15秒
退火：50–65℃，20–30秒
延伸：72℃，20–30秒
荧光采集点：根据探针类型选择退火或延伸阶段进行信号采集。
熔解曲线：从60℃逐步升温至95℃，每步0.5℃，实时记录荧光信号。
3. 荧光通道选择
根据实验染料选择合适的检测通道，例如：
FAM：常用于SYBR Green或TaqMan探针。
HEX/VIC：用于多重检测中的第二目标。
ROX：可作为被动荧光参考。
五、样本加载
1. 反应体系准备
每孔推荐20µL体系，包括：
Master Mix：10µL
上下游引物：各0.5–1µL
模板DNA/cDNA：1–2µL
荧光染料/探针：按实验方案添加
无核酸水补足体积
2. 加样注意事项
使用无酶枪头，避免交叉污染。
保证各孔体积一致。
避免气泡进入反应孔，如有气泡可轻敲或离心消除。
3. 封板与放置
使用光学封板膜或透明管盖，确保密封。
将样品离心，使液体集中孔底。
放入FQD-16B反应模块，保持平整。
六、实验运行与监控
1. 启动实验
确认程序设置与样本信息无误。
点击“运行”，系统自动执行预设循环程序。
2. 实时监控
实验过程中可实时查看：
各孔扩增曲线
荧光信号强度
温度曲线运行状态
3. 异常提示
若出现异常，如温控不稳定、光学信号弱，设备会发出提示。此时应暂停或终止实验并检查问题。
七、数据分析
1. 扩增曲线
标准的“S”型曲线表示扩增成功。
平缓或无明显上升曲线提示扩增失败或模板过少。
2. Ct值计算
系统自动计算Ct值，Ct值越小代表模板浓度越高。
3. 熔解曲线
单一尖锐峰：扩增特异性良好。
多个峰：可能存在非特异性扩增或引物二聚体。
4. 定量分析
绝对定量：通过标准曲线计算拷贝数。
相对定量：采用ΔΔCt方法计算不同样本间的表达差异。
5. 报告生成
系统自动生成报告，包含：
样本编号与Ct值表
扩增曲线、熔解曲线
PCR效率、R²值
报告可导出为PDF、Excel等格式。
八、常见问题与排查
1. 无扩增信号
检查反应体系是否正确配置。
确认模板质量与浓度是否合适。
2. Ct值过高或不一致
检查加样体积是否准确。
样品保存条件是否导致降解。
3. 曲线异常
检查是否存在气泡。
核实引物设计与反应条件是否优化。
4. 光学信号弱
检查封板膜是否透光良好。
清洁光学检测窗口，避免灰尘影响。
九、维护与保养
1. 日常维护
实验后清洁反应模块，保持干燥。
定期擦拭外壳，避免灰尘堆积。
2. 光学系统
避免用手触碰光学窗口。
定期检查并用无尘布清洁。
3. 温控系统
每半年进行一次温度校准。
确保散热口畅通，避免过热。
4. 软件与数据
定期更新分析软件。
定时备份实验数据。
十、安全注意事项
操作过程中需佩戴实验服和手套，避免污染。
使用无RNAse、无DNAse耗材，减少降解风险。
废弃样品和耗材需按照生物安全规范处理。
设备运行时勿随意开关舱盖，避免光学干扰或温控异常。
十一、结语
博日荧光定量PCR仪FQD-16B凭借其稳定的温控系统、灵敏的光学检测和友好的操作界面，为小通量实验提供了强有力的技术支持。通过规范的操作流程和定期的维护保养，实验人员能够充分发挥该仪器的性能，获得高质量、可重复的实验结果。
FQD-16B不仅适用于基础科研，也广泛应用于临床检测、教学实验和食品安全领域，是一款集精准、稳定和高效于一体的可靠平台。
