宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P操作培训资料
一、培训背景
实时荧光定量PCR技术已成为分子生物学和临床检验的核心检测手段。宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P是一款中通量实时检测平台，具备稳定的温控系统和多通道荧光采集能力，能够满足科研与医学检测对核酸定量分析的需求。
在实验室管理中，只有通过系统化的培训，确保实验人员熟悉SLAN-48P的操作流程、数据处理与维护要点，才能保证实验结果的准确性和可重复性。编写本培训资料的目的，是帮助操作者从零起步，逐步掌握SLAN-48P的使用方法，并提升实验室的整体检测水平。
二、培训目标
了解SLAN-48P的整体结构、功能特点和适用范围。
熟练掌握样品制备、反应体系配置和加样操作。
独立完成仪器的程序设定与实验运行。
学会读取扩增曲线、判断Ct值并进行数据分析。
掌握常见问题的排查与解决方法。
熟悉仪器的维护与保养，延长使用寿命。
三、仪器构造与功能
1. 样品仓
可容纳48孔反应板或相应管架。
温度均一性强，确保各孔反应条件一致。
2. 光学模块
配备多通道荧光检测系统，可同时监测不同染料信号。
常用通道包括FAM、HEX/VIC、ROX、Cy5。
3. 温控系统
采用精密控温技术，升降温速率稳定。
温差误差小于±0.2℃，保证扩增效率一致。
4. 软件平台
提供实验程序设定、实时曲线显示、Ct值计算、标准曲线生成和融解曲线分析功能。
支持数据导出与报告生成。
四、实验前准备
环境要求
保持实验室清洁，分区操作，避免气溶胶污染。
控制温湿度在合适范围内。
耗材准备
48孔反应板或专用管。
光学透明封板膜。
无RNAse、DNAse吸头和移液器。
样品准备
提取高质量DNA或RNA。
检测核酸浓度与纯度，确保样品适合PCR扩增。
软件设定
打开SLAN-48P软件，创建新实验文件夹。
检查实验模板是否更新。
五、操作流程
1. 配制反应体系
每孔总体积一般为20–25 μL。
按照配方加入缓冲液、dNTP、引物、探针、Taq酶和模板。
设置阳性对照、阴性对照和无模板对照。
2. 加样与封板
精准移液，避免气泡。
用光学膜密封反应板，并进行短暂离心。
3. 程序设定
初始变性：95℃，2–3分钟。
循环步骤：95℃ 10秒，55–65℃ 30秒，40–45次。
选择对应荧光通道。
4. 启动实验
将反应板置入样品仓。
关闭仓盖，点击软件“运行”。
实时监控扩增曲线。
5. 数据采集
软件自动记录荧光强度与循环数。
实验结束后生成扩增曲线、Ct值与标准曲线。
六、数据分析
1. 扩增曲线
标准“S”型曲线表明扩增成功。
平滑上升并进入平台期为理想状态。
2. Ct值
系统自动计算阈值并给出Ct值。
Ct值小表示模板浓度高。
3. 标准曲线
用已知浓度样品绘制曲线，斜率约-3.3为最佳。
R² > 0.99，表明线性良好。
4. 融解曲线
单一峰值代表特异性扩增。
多峰或拖尾提示引物二聚体或非特异性。
5. 报告生成
导出Excel、PDF或图片格式，便于存档与共享。
七、常见问题与解决方案
无扩增曲线
检查模板质量、引物设计和酶活性。
Ct值过高
模板量不足或降解。
阈值设置过高。
重复性差
加样不均匀或存在气泡。
板膜未贴紧。
信号干扰
光学窗口受污染。
通道设置错误。
八、维护与保养
日常维护
实验后擦拭样品仓。
保持光学窗口清洁。
定期校准
温控系统和光学系统需定期检测。
使用标准品进行性能验证。
软件维护
定期升级至最新版。
建立数据分类与备份机制。
九、应用案例
案例一：呼吸道病毒检测
通过特异性探针检测呼吸道病毒RNA，Ct值在22–25范围，结果显示阳性。
案例二：肿瘤基因表达
对肿瘤组织样品进行检测，目标基因与内参基因比较后发现相对表达量显著升高。
案例三：食品转基因成分分析
检测转基因元件，扩增曲线典型，Ct值与标准曲线吻合，判断为转基因阳性。
十、培训考核
理论测试
涵盖仪器结构、实验原理、程序设定与数据分析。操作考核
独立完成一次完整实验，包括加样、设定程序、运行与导出数据。结果解读
根据扩增曲线与Ct值，撰写简短实验分析报告。
十一、总结
宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P是一款中通量、稳定可靠的核酸检测平台。通过本次培训资料的学习，实验人员能够：
掌握SLAN-48P的结构与功能；
独立完成实验操作流程；
准确进行数据分析与结果解读；
熟悉常见问题排查与维护保养方法。
在科研与临床实践中，SLAN-48P的应用不仅能提高实验效率，也能确保数据的科学性和可靠性。通过规范化培训与标准化操作，实验室整体水平将得到显著提升，为分子检测与精准医学提供坚实支持。
