宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P快速上手指南
一、设备认识
1. 基本定位
宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P是一款中通量的实时荧光定量PCR系统。它能够在一次实验中同时完成48个反应孔的扩增和检测，特别适合日常检测和中小规模实验室应用。
2. 核心功能
3. 硬件组成
样品仓：容纳48孔反应管，密封性强。
光学系统：配置多通道滤光片，可检测多种荧光染料。
温控模块：升温降温迅速，保证控温精度。
通讯系统：通过USB或网线与计算机连接。
二、实验准备
1. 环境条件
室温18–30℃，湿度30%–80%。
避免阳光直射和强电磁干扰。
实验台稳固、防震，环境保持清洁。
2. 耗材与试剂
耗材：48孔反应管、光学封膜。
试剂：PCR预混液、引物、探针或荧光染料。
样品：DNA或RNA模板（RNA需先反转录）。
3. 对照设置
阴性对照：不含模板，用于检验污染。
阳性对照：标准模板，用于验证体系有效性。
重复孔：建议每个样品设置重复，确保结果稳定。
三、反应配置
1. 常见体系（20µL）
PCR预混液：10µL
上游引物：0.5µL
下游引物：0.5µL
探针或染料：0.5–1µL
模板DNA/cDNA：2–5µL
无核酸酶水：补足至20µL
2. 操作要点
在无污染区内操作，佩戴手套。
每次移液需更换枪头。
加样完成后轻轻离心，消除气泡。
四、软件设置
1. 新建实验
打开软件，点击“新建实验”。
输入实验名称、操作者和保存路径。
2. 程序设定
初始变性：95℃，2–3分钟。
循环步骤：
变性：95℃，10–15秒；
退火：55–65℃，20–30秒；
延伸：72℃，20–30秒。
循环次数：35–45次。
采集点：通常设在退火或延伸阶段。
3. 荧光通道
选择相应的荧光通道，如FAM、HEX、ROX、CY5。
多重实验需为不同靶标分配不同通道。
4. 样品布局
在软件的48孔界面中输入样品编号。
标注阴性和阳性对照。
可使用颜色标记不同分组。
五、实验运行
1. 样品装载
将反应管轻放入样品仓，注意方向。
关闭舱盖并锁紧，确保密封。
2. 启动实验
在软件中点击“开始运行”。
实验过程中，软件实时显示扩增曲线和温度曲线。
3. 实时监控
检查阴性对照是否保持无信号。
观察阳性对照是否在合理Ct范围内出现曲线。
若有异常，软件会发出提示。
六、结果分析
1. 扩增曲线
理想曲线应呈现S型。
阳性对照应有稳定曲线，阴性对照应无曲线。
2. Ct值
软件自动计算Ct值。
用户可根据曲线情况手动调整阈值。
3. 标准曲线
使用标准模板绘制标准曲线。
R²≥0.98，PCR效率在90%–110%之间为理想值。
4. 熔解曲线
单峰表示产物特异性好。
多峰说明存在非特异性扩增或引物二聚体。
5. 报告生成
软件可导出Excel、PDF、Word、图片等格式。
报告包含曲线图、Ct值表格、实验参数等。
七、常见问题与排查
Ct值过高或无扩增
模板量不足或降解。
试剂失效，需更换。
熔解曲线出现多峰
说明有非特异性扩增。
需提高退火温度或优化引物。
重复性差
原因可能是加样不一致、气泡或封膜不严。
软件无法连接仪器
检查USB或网线是否接触良好。
重启软件和仪器。
八、维护与保养
1. 日常操作后
实验结束后，及时取出反应管。
用无水乙醇清洁样品仓。
2. 光学系统
定期擦拭光学窗口，避免灰尘和试剂污染。
3. 温控系统
定期进行校准，确保温控精度。
4. 存放
长期停机时切断电源，覆盖防尘布。
存放环境干燥通风。
九、应用场景
十、快速上手要点总结
先检查环境与仪器：确保温湿度合适，电源与连接正常。
规范配置反应体系：避免污染，设置对照。
正确设定软件参数：温度、循环、通道、样品布局。
实时关注运行状态：监控曲线，及时发现异常。
分析与导出结果：根据扩增曲线、Ct值和熔解曲线综合判断。
注重维护：定期清洁、校准，确保长期稳定运行。
十一、总结
宏石荧光定量PCR仪SLAN-48P凭借稳定的性能、简便的操作流程和直观的软件界面，使实验人员能够在短时间内上手并掌握其使用方法。从准备到运行再到结果分析，整个实验链条清晰完整。通过快速上手指南的学习，操作者不仅能避免常见错误，还能高效完成检测任务，在临床诊断、科研探索和教学培训中获得准确可靠的数据。
