一、仪器概述
博日实时荧光定量PCR仪 FQD-16A 是一款基于实时荧光信号检测技术的核酸扩增与定量检测设备。它通过在PCR反应过程中采集荧光信号，实现扩增过程的动态监控与定量分析。相比传统PCR只能在终点进行检测，FQD-16A 能在每一循环过程中记录信号变化，准确反映核酸扩增趋势，从而实现更快速、灵敏和高效的实验结果。
FQD-16A 在科研和应用领域都具有广泛用途，包括病原体核酸检测、转基因检测、基因表达分析、药物靶点研究、食品安全监控以及临床分子诊断等。由于其体积适中、操作简便、软件功能强大，适合科研实验室和应用检测中心使用。
二、功能与性能特点
实时检测：在扩增反应的每个循环过程中采集荧光信号，生成完整扩增曲线。
多通道荧光检测：支持常见荧光染料和探针，包括FAM、HEX、ROX、CY5等，可进行单重或多重检测。
温控系统精准：采用先进的半导体热循环控制技术，温度均一性良好，确保每个孔反应一致。
操作简便：配套软件直观，支持模板导入、实验设计、自动分析及报告输出。
数据处理多样化：内置标准曲线法、相对定量法、基因分型及熔解曲线分析等功能。
结构紧凑：体积较小，适合在常规实验室条件下安装与使用。
安全可靠：具有过温报警、数据自动保存和断电保护等功能，保证实验连续性与安全性。
三、安装与调试
1. 环境条件
温度范围：18–30℃
相对湿度：40%–80%
电源：AC 220V ±10%，50Hz
实验台：稳固、平整、防震，避免阳光直射及强气流干扰
环境清洁，远离强磁场和腐蚀性气体
2. 安装步骤
从包装箱中取出仪器，放置在实验台上。
检查电源线及配件是否齐全，确认电源接地良好。
将计算机与仪器通过USB或网络接口连接。
启动仪器进行自检，确保光学和温控模块正常工作。
在计算机上安装配套软件，确认通信正常。
3. 初始校准
执行光学系统校准，保证各通道检测一致性。
使用厂家提供的标准样品进行检测验证，确认扩增效率与曲线线性符合要求。
四、实验前准备
试剂准备
反应液需低温保存，避免反复冻融。
荧光探针、引物及酶应严格按照说明书比例配制。
样品准备
核酸提取后需检测纯度和浓度，OD260/280 值应在1.8–2.0之间。
建议新鲜样品立即使用，必要时低温保存。
耗材准备
使用专用PCR反应管或反应板，保证光学透过率和密封性。
配备无气泡移液枪头，避免交叉污染。
反应体系配置
根据实验目的选择反应体系（绝对定量或相对定量）。
确保体系总量、模板用量及引物浓度合适。
五、操作流程
1. 实验方案建立
打开软件，新建实验文件。
选择实验类型：绝对定量、相对定量、熔解曲线或基因分型。
设置循环条件，包括变性、退火、延伸温度与时间。
2. 样品板配置
将反应体系分装至PCR反应管或反应板。
加入模板DNA、阴性对照与阳性对照。
盖紧封膜，避免液体蒸发。
3. 仪器加载
打开样品仓，将反应板放入并摆放平整。
关闭仓门，避免外界光线影响检测。
4. 启动实验
点击软件“运行”，仪器开始循环扩增与荧光采集。
实验过程中可实时查看扩增曲线。
5. 数据采集与分析
实验结束后，软件自动生成Ct值。
通过标准曲线计算拷贝数，或使用ΔΔCt法分析相对表达量。
生成熔解曲线，判断扩增产物的特异性。
六、注意事项
严格区分样品区、配液区和扩增区，避免交叉污染。
每次使用后，清洁仪器表面和样品仓。
实验中必须佩戴一次性手套和实验服。
不要在仪器运行过程中随意开关样品仓。
使用移液器前需校准，确保加样准确。
实验结果应及时导出并保存。
七、维护与保养
日常保养
每次使用后用干净无尘布擦拭仪器表面。
样品仓保持清洁干燥，避免液体泄漏。
光学系统
定期检查通道透镜，防止灰尘遮挡。
若荧光信号明显减弱，应联系专业人员校准。
温控系统
保持通风口畅通，定期清理灰尘。
避免长时间连续高负荷运行。
软件维护
定期更新软件版本。
建立数据备份机制，防止文件丢失。
八、常见问题与解决
无扩增信号
检查试剂是否失效或体系是否正确配置。
样品浓度是否过低或降解。
曲线异常
存在气泡或加样不均。
光学通道可能被污染。
熔解曲线杂峰
产物存在非特异性扩增或引物二聚体。
建议优化退火温度与引物设计。
Ct值偏差大
样品分装不均，或反应体系出现误差。
移液器需重新校准。
九、安全规范
遵循实验室生物安全管理制度。
临床或病原体样品应在二级防护条件下操作。
废液与耗材需经高压灭菌后弃置。
仪器周边应保持干燥，避免液体进入电路。
十、应用场景
病原微生物检测：快速识别病毒、细菌核酸。
转基因检测：食品与农业样本的基因修饰成分分析。
基因表达研究：对比不同实验条件下基因的相对表达水平。
药物研发：监控药物对基因表达或病原体复制的影响。
临床诊断：辅助疾病诊断与个体化治疗研究。
十一、总结
博日实时荧光定量PCR仪 FQD-16A 集成了先进的光学检测与温控技术，具备高灵敏度、多功能和操作简便的优势。通过正确的安装调试、科学的实验操作及规范的维护保养，用户能够获得可靠的核酸定量分析结果。熟练掌握操作步骤和常见问题的处理方法，将显著提升实验效率和数据准确性，使该设备在科研、临床和检测领域发挥更大价值。
