博日荧光定量PCR仪 FQD-96C 使用说明

一、前言

荧光定量PCR（Quantitative Real-Time PCR，简称 qPCR）技术是现代分子生物学和医学检测领域的重要实验方法。它通过实时监测 PCR 反应过程中荧光信号的变化，实现对目标核酸的定量检测。博日 FQD-96C 荧光定量PCR仪作为一款高性能的核酸检测设备，凭借其高灵敏度、多通道检测能力、稳定的温控系统和智能化分析软件，广泛应用于科研、临床、食品安全和环境监测等多个领域。

为了帮助实验人员更好地掌握仪器的使用方法，本文将从设备结构、安装调试、实验准备、操作步骤、数据分析、结果保存、维护保养及注意事项等方面进行详细说明。

二、仪器结构与功能概述

1. 基本结构

• 热循环系统：采用高效半导体加热/制冷模块，保证温度均一性和快速升降温速率。

• 光学检测系统：多通道荧光检测模块，支持常用荧光染料与探针。

• 操作面板与显示屏：提供触控界面，可进行参数设置与状态监控。

• 样品台：标准 96 孔板设计，兼容多种耗材。

• 接口：包括 USB 接口、局域网接口等，方便数据导出与联网管理。

2. 主要功能

• 实时检测荧光信号，生成扩增曲线。

• 自动计算 Ct 值，支持绝对定量与相对定量分析。

• 提供熔解曲线功能，检测产物特异性。

• 支持多重 PCR 实验。

• 自动生成实验报告，支持多种格式导出。

三、安装与调试

1. 安装环境要求

• 温度：15–30℃，相对湿度 <70%。

• 电源：AC 220V，50Hz，带有稳定电压保护。

• 桌面：稳固、平整，避免震动。

• 环境：避免阳光直射和强磁干扰。

2. 仪器安装步骤

• 将仪器从包装箱中取出，置于稳固的实验台上。

• 检查电源线、USB 数据线、光纤接口等配件是否齐全。

• 连接电源并开启开关，观察系统是否正常启动。

• 根据需要，将仪器连接至电脑或局域网。

3. 初次调试

• 进入系统主界面，设置语言、时间和基本参数。

• 运行自检程序，确认温控与光学模块是否正常。

• 准备试剂进行功能性实验，验证扩增曲线和 Ct 值结果的稳定性。

四、实验准备

1. 试剂准备

• 核酸模板：RNA 或 DNA，需经过提取与纯化。

• 引物与探针：根据实验目的设计，确保特异性。

• PCR 反应混合物：含有 DNA 聚合酶、缓冲液、dNTP、Mg²⁺ 等。

• 荧光染料或探针：如 SYBR Green、TaqMan 探针等。

2. 耗材准备

• 96 孔反应板或 PCR 管条。

• 封板膜或光学透明盖。

• 移液器与无 RNase/DNase 的枪头。

3. 样品制备

• 严格按照操作规范配置反应体系。

• 避免交叉污染，设置阴性对照与阳性对照。

• 样品充分混匀后，离心去除气泡。

五、操作步骤

1. 开机与登录

• 打开电源，系统进入主界面。

• 根据权限设置输入用户信息，确保数据溯源。

2. 程序设置

• 在软件中建立新的实验项目。

• 设定反应程序：包括预变性、变性、退火、延伸等阶段的温度与时间。

• 设定循环次数（通常为 35–45 次）。

• 设置荧光通道，选择相应的染料或探针。

3. 样品加载

• 将配制好的反应体系加入反应板或管条。

• 用透明光学封板膜封口，确保密封严密。

• 将反应板放入样品台，关闭盖板。

4. 运行实验

• 启动程序，仪器进入自动化运行。

• 实验过程中可实时观察扩增曲线的生成。

5. 实验结束

• 程序完成后，系统自动保存实验结果。

• 打开盖板，取出反应板并妥善处理。

六、数据分析

1. 扩增曲线

• 观察曲线形态，判断反应是否成功。

• 指数扩增期的曲线说明扩增效率良好。

2. Ct 值分析

• 软件自动生成 Ct 值表格。

• 通过对照组与实验组比较，计算基因表达差异。

3. 熔解曲线

• 检查是否存在单一峰，判断产物特异性。

• 多峰可能提示引物二聚体或非特异性扩增。

4. 标准曲线与定量分析

• 通过已知浓度样品建立标准曲线。

• 计算未知样品浓度或拷贝数。

5. 结果输出

• 自动生成报表，包含 Ct 值、扩增曲线、熔解曲线等信息。

• 支持 PDF、Excel、JPG 等格式导出。

七、实验结果保存与导出

1. 本地保存

• 实验结束后数据自动保存至仪器内存。

• 可根据日期或项目名称进行分类管理。

2. 外部导出

• 通过 USB 将数据导出至移动存储设备。

• 通过局域网传输至实验室服务器，实现集中管理。

3. 云端存储（部分型号支持）

• 将数据上传至云端，实现远程访问与共享。

八、维护与保养

1. 日常维护

• 每次实验后清理仪器表面，避免灰尘堆积。

• 样品台定期清洁，防止残留物影响检测。

2. 定期保养

• 检查电源与接口是否完好。

• 定期运行自检程序，确保光学模块和热循环模块正常。

• 每半年进行一次专业校准，保证温控精度。

3. 常见故障处理

• 温控异常：检查电源与散热系统。

• 荧光信号偏弱：检查耗材质量和反应体系。

• 软件运行缓慢：清理历史数据，保持系统稳定。

九、注意事项

1. 样品制备需在无 RNAse/DNAse 污染的环境中进行。

2. 严格区分试剂与耗材，避免交叉污染。

3. 实验过程中不可频繁开关盖板，以免影响温度均一性。

4. 不得随意移动或震动仪器。

5. 定期更新软件版本，获取最新功能与修复。

十、应用案例简述

1. 科研应用

• 用于基因表达谱研究，通过 ΔΔCt 方法分析不同处理组基因表达差异。

2. 临床检测

• 病毒载量检测，通过 Ct 值评估病原体浓度。

3. 食品与环境监测

• 检测转基因作物、致病菌或水体污染源。

十一、结语

博日 FQD-96C 荧光定量PCR仪是一款集高效、精准与智能化于一体的实验设备。在实际使用中，只要严格按照操作规范进行实验，正确分析数据并妥善保存结果，便能充分发挥其在科研与临床中的价值。通过本使用说明，实验人员可以更快地掌握操作流程，减少错误，提高实验成功率与数据可靠性。