博日荧光定量PCR仪FQD-96A使用说明

一、概述

博日荧光定量PCR仪FQD-96A是一款高性能的实时荧光定量PCR检测设备，广泛应用于分子生物学、临床检验、病原体检测、食品安全以及环境监测等领域。该设备通过光学系统实时检测PCR反应过程中荧光信号的变化，实现目标核酸的定性和定量分析。

FQD-96A采用先进的温控模块与光学采集技术，能够提供高灵敏度、宽动态范围和高度重复性的实验结果。为保证用户能够高效、安全地使用设备，本说明书将对操作流程与管理要点进行系统介绍。

二、安装与开机

1. 安装条件

• 实验环境温度：15℃–25℃

• 相对湿度：40%–60%

• 电源要求：AC 220V ±10%，50/60Hz，良好接地

• 台面要求：稳固、平整，避免强震动和阳光直射

• 空间要求：设备四周需预留至少30cm通风空间

2. 开机前检查

• 仪器外壳无破损，电源线接口良好

• 样品仓清洁，无液体残留

• 电源插座电压稳定

3. 开机步骤

1. 接通电源，打开电源开关

2. 仪器启动后执行自检，包括温控模块和光学模块检查

3. 自检通过后进入主界面，可选择“新建实验”或“读取实验”

三、操作流程

1. 实验准备

• 准备PCR反应体系，包括模板、引物、探针或染料、dNTPs、缓冲液和Taq酶

• 使用八联管或96孔反应板，确保与设备规格匹配

• 样品封板或加盖，避免蒸发和污染

2. 样品装载

• 打开样品仓，放入反应板，确保与托盘对齐

• 关闭仓盖，避免强力压迫

3. 软件设置

• 在主界面输入实验名称和操作者信息

• 设置扩增程序，包括变性、退火和延伸的温度与时间

• 选择荧光通道（如FAM、HEX、ROX等），根据实验方案确定检测模式

• 输入样本编号及对应位置，建立样本信息表

4. 实验运行

• 启动程序后，系统进入温度循环

• 光学模块同步采集荧光信号，实时生成扩增曲线

• 用户可在运行过程中监控数据变化

四、实验设置细节

1. 温度循环参数

• 变性温度：94–95℃

• 退火温度：55–65℃，具体根据引物设计优化

• 延伸时间：根据片段长度调整，一般200–400bp需30秒

2. 阈值设置

• 系统可自动计算阈值，也可人工调整

• 阈值应位于指数扩增区的中上部，避免背景噪音干扰

3. 标准曲线与定量

• 使用系列稀释的标准样品建立标准曲线

• 确保扩增效率在90%–110%，相关系数R² ≥ 0.99

4. 对照设置

• 阴性对照：监控污染

• 阳性对照：验证体系有效性

• 内参对照：校正样本质量差异

五、数据分析

1. Ct值判定

Ct值为荧光信号首次超过阈值时的循环数，是定量分析的关键参数。

2. 融解曲线分析

• 单一峰值表示扩增产物特异

• 多峰值或拖尾提示存在非特异扩增或引物二聚体

3. 定量分析

• 绝对定量：依赖标准曲线计算模板拷贝数

• 相对定量：使用ΔΔCt方法比较不同样本的表达差异

4. 数据导出

• 数据可导出为Excel、PDF或图像文件

• 支持局域网共享，便于团队协作

六、维护与保养

1. 日常清洁

• 每次实验后清理样品仓，避免残留物污染光学系统

• 用无尘布擦拭仪器外壳，避免化学试剂接触

2. 定期维护

• 每月检查电源线与接口

• 每季度进行光学系统和温控模块校准

• 定期升级软件，获取优化功能

3. 存放条件

• 长期停机时，保持环境温度15℃–25℃

• 每2–3周开机一次，防止电子元件长期不工作

七、安全注意事项

1. 操作人员需经过专业培训，熟悉设备性能

2. 实验过程中佩戴手套，避免污染样品仓

3. 不得在仪器上方放置液体或重物

4. 断电或异常情况下不得强行开盖，应先排查问题

5. 严禁擅自拆卸或改装设备

八、常见问题与解决

1. 无法开机

• 检查电源连接

• 确认电压稳定

• 若仍无反应，应联系专业人员

2. 自检失败

• 光学异常：清洁样品仓盖

• 温控异常：检查环境温度和湿度

3. 数据异常

• 扩增曲线无上升：检查模板或引物

• Ct值差异过大：检查移液操作是否准确

4. 软件卡顿

• 导出数据并清理存储空间

• 重启软件或更新版本

九、实验优化建议

• 通过梯度退火实验优化引物结合温度

• 适当调整Mg²⁺浓度提升扩增效率

• 使用内参基因控制实验误差

• 定期通过标准样品验证仪器性能

十、总结

博日荧光定量PCR仪FQD-96A的使用说明不仅仅是操作指南，更是实验室规范化管理的重要参考。通过严格遵循安装要求、操作步骤、实验设置和维护保养，用户可以确保实验数据准确、稳定和可重复。该仪器的设计兼顾了高灵敏度与易操作性，能够满足科研与临床检测的多样化需求。未来随着智能化发展，FQD-96A的使用将更加高效，但规范化操作依然是保障实验成功的关键。